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2020 年 06 月 24 日

Opentrons 客户采访 | 谢菲尔德大学的 Oscar Swindley

Oscar Swindley 在谢菲尔德大学从事单克隆抗体折叠和组装工作。他使用 Opentrons OT-2 移液机器人对细胞培养物进行滴度测定。

谢菲尔德大学是英国极具影响力的研究型大学之一,建校历史悠久,在 2022 QS 世界大学排名第 95 名。Oscar Swindley 是谢菲尔德大学化学与生物工程系博士,从事单克隆抗体折叠和组装工作。他使用Opentrons OT-2 移液机器人进行滴度测定以进行细胞培养开发。今天他将为大家分享他对 OT-2 的使用体验。

Oscar Swindley 是谢菲尔德大学化学与生物工程系的博士生,合成生物学平台开发团队的一员。该实验室于2019年8月购买了首台 Opentrons OT-2,用于细胞培养开发的滴度测定自动化,Oscar 就是负责操作 OT-2 的深度用户。

Oscar Swindley. 图片来源: Oscar Swindley

Opentrons: 请介绍一下您的研究背景?

Oscar Swindley: 我从事的研究方向是单克隆抗体折叠和组装过程的遗传及化学操作,以及自动化程序的优化和集成。我们使用 OT-2 在我们的实验室中执行大量的细胞培养操作。我刚刚完成了我们的第一个大型筛选项目,其中所有细胞培养,转染,样品收集和滴度测定都在 OT-2 上进行。

Opentrons: 如何形容您在实验室的一天?

OS: 最近我正在处理在 OT-2 上完成的第一次大规模细胞培养筛选的结果。我一直在使用 OT-2 进行滴度测定。OT-2 支持并简化了整个流程。除此之外,我的常规日常工作包括在摇瓶和孔板上进行常规的细胞培养,以及在分子生物学实验室进行其他实验。

Oscar 的 OT-2 甲板布局。图片来源: Oscar Swindley

Opentrons: 您为什么选择 OT-2?

OS: 在我们的实验室引入 OT-2 的目的是提高我们平台的可重复性。我们在实验室使用 24 孔和 96 孔板进行高通量筛选。我们面临的主要困难是转染,因为当我们以非常高的密度重新悬浮细胞时,溶液会变得粘稠,细胞会迅速沉降。我们需要准确地把样品分配到整个孔板上,以便在每个孔中种植相同数量的细胞。这是一个大量重复的过程,且处理的液体体积非常小。我们面临的最大问题是如何在细胞随着时间推移会逐渐沉降的情况下,始终保持液体充分混合并成功种植细胞。

Opentrons: 您具体使用 OT-2 做什么,它如何适应您的工作流程?

OS: 我们使用 OT-2 来设置和运行我们的96孔电转染平台,从多种培养板格式取样,并执行板基测定。特别是对于我们的电转染平台,OT-2 将 DNA、缓冲液和细胞结合在一起,然后将混合物分配到电转染板中。转染后,OT-2 进行稀释、混合和为细胞提供养分,然后将其种入 24 孔培养板中。3 天后我们将用机器人对培养物进行测定。这包括混合和从培养板取样进行各种下游测定。最后,OT-2 能够将样本加载到玻璃片上,用于我们的高通量细胞计数器,并收获上清液进行滴度分析。在最近的一组筛选实验中,OT-2 帮助我们进行了 22 个电转染板和相关的取样。OT-2 只需 20 分钟就能运行一次滴度分析,这太棒了。我可以全天让机器人持续运行。

Opentrons: 使用你们的 OT-2 开始实验是什么感觉?

OS: 我编写第一个协议脚本大约花费了 2 个月的时间。但是脚本一旦完成,所有的信息都在脚本里,我就可以快速地继续进行更复杂的实验。我把我的所有脚本都上传到了我的 GitHub 页面上,如果有兴趣的话,大家都可以去看看。

Opentrons: 在使用 OT-2 之前,您是否使用过其他实验室自动化设备?

OS: 没有。我以前使用过 BioMek,并设置了 SOP。为了更好地对 OT-2 进行编程,我在 8 月至 11 月期间学习了 Python。

Opentrons: 您还有关于 OT-2 的其他体会要跟大家分享的吗?

OS: 总体来说这是一台好设备,但它没有安全保障装置,也就是说,它无法识别障碍物,也无法意识到吸头是否掉落。我们现在遇到的问题是如能能够在故障发生时进行追踪。另一个困难是设备与 24 孔板的兼容性不强,因此我不得不想办法骗过它,方法是每隔一行取出吸头。但是如果你知道如何编程控制机器人,你总是可以找到解决方案的。总的来说,我认为它非常适合用于研究,在你的每次实验中你可以根据你的需求调整实验方案。

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