Opentrons Flex：让文库制备流程更便捷！

随着测序项目的不断扩展和测序技术的持续发展，为了节省宝贵的时间和减少人力资源的消耗,实验室对于简化文库制备流程的需求日益迫切。

现今，自动化文库制备流程已经成为应对这一挑战的有效策略。文库制备的化学方法，例如支持自动化、缩短工作流程以及减少移液步骤等特点也大幅提升了文库制备过程的效率。

在本文中，我们将详细介绍如何通过 Opentrons Flex平台，结合 QIAseq^® FX DNA Library Kit 与 QIAseq^® Normalizer Kit 实现自动化文库制备，从而更高效地为大肠杆菌、人类基因组以及混合微生物 DNA 制备文库。

图 1 . QIA seq 工作流程初始甲板布局：两个 Flex 8 通道移液器、 Flex 转板抓手和放置在甲板上的模块。

图 2 . 在 Opentrons Flex 上自动化 QIAseq^® FX DNA Library Kit 和 QIAseq^® Normalizer Kit 工作流程，可以将总体工作流程时间缩短数小时，并将实际操作时间缩短至不到 1 小时。时间是基于 96 个样本通量的预估值。

图 3 . 以大肠杆菌基因组 DNA 制备的高产量和高均一性的文库。图中所显示的数据是使用 8 个大肠杆菌 DNA 样本各 100 ng 输入量，经过 15 分钟的片段化和 6 个循环的扩增后， 生成的文库数据。

图 4 . 在混合微生物样本中，不同 GC 含量的物种之间的群落特征比较。所显示的数据是从 8 个 ATCCMSA-1003 样品，使用 1 ng 输入量，经过 14 分钟的片段化(含 2.5 μL FX Enhancer)、12 个循环的扩增和 1:10 的接头稀释而生成的。

表 5 . 从人类基因组 DNA 制备的高产量和均一的文库。该组数据是使用 Promega 公司提供的 8 各男性人类基因组 DNA 样本生成的，输入量为 100 ng ，经过 15 分钟的片段化和 6 个循环的扩增。

图 5 . QIAseq^® Normalizer Kit 可以从不同输入 DNA 浓度的样本中产生重复性好、标准化的 DNA 文库。为了证明这一点，我们使用 24个大肠杆菌 DNA 样本，输入量范围从 10 到 100 ng （变异系数为 64.67% ）。我们使用 QIAseq^® FX DNA Library Kit 和 QIAseq^® Normalizer Kit（ 工作流程 B ） 处理了这些样本，并在文库制备后分别取出了标准化前和标准化后的等分样本进行检测分析。分析可知，QIAseq^® Normalizer Kit 制备的文库浓度适合测序（平均为 1.8 ng/μl ），且文库浓度的质量不稳定性下降（变异系数从 33.85% 降低到 13.53% ）。