在OT-2上执行连续稀释

摘要
连续稀释度是各种生物实验的重要组成部分。例如，生成DNA、蛋白质或细胞培养的标准曲线需要以恒定的稀释系数稀释样品的用例。在这里，我们提出了一种替代执行这些重复步骤的手动移液。opentronOT-2机器人可以在大约2分钟内连续稀释8个样品，稀释10次在复制之间具有很高的可靠性。的的系数所表示的精度每列的差异与更昂贵的液体处理平台相当。我们鼓励用户根据其特定的科学应用程序调整所附的参数化协议。

介绍
连续稀释既是独立的实验，也是更复杂的实验管道的构件。应用可以是简单地生成一个标准曲线或更复杂的表型表征跨细胞培养浓度。在任何应用中，都需要精确的移液才能产生可靠的结果。一般来说，人工实验室工作可以在协议中的任何移液步骤中引入随机错误。这些移液不准确可以包含不正确的稀释因子sampIes.移液管的混合速度和尖端高度可以提高精度，但在手动移液的过程中，要保持不变却具有挑战性。此外，重复移液随着时间的推移，重复移液会加重损伤。OT-2是一种替代选择以确保移液的可靠性和最终的连续稀释实验的数据质量。

材料
-2液体处理机器人
-2软件版本3.1.2
-光电管p300多通道移液管
-视中心300µLTip机架
-美国科学12-channeI自动化水库（1061-8150）
-康宁96井EIA/RIA易清洗tm透明平底聚苯乙烯（3368）
-康宁500 mL分子生物学级水（46-000-CV）
-麦考密克公司提供的各种食品颜色和鸡蛋染料-蓝色

• Tecan无限F200 pro

协议
1.用50µL蓝色食用染料和10 mL分子生物学级水制备蓝色染料溶液。
2.将200µL的蓝色染料溶液加入到96-weIIlat底部钉剂的A1-H1的weIIs中。
3.在槽式储层的A1孔中加入20 mL稀释剂。
注：最后一次稀释后的列是空白区域的默认位置。槽/储层的最后一口井是默认的液体垃圾。
4.根据图1a中的甲板布局，在插槽1-3中布置实验室餐具。
-插槽1=视中心300µLtip机架
-槽2=12通道水库

• SIot 3 = 96-weIIlat底部钉
  5.请将协议中的参数更改为以下参数：
  -稀释因子=为1.5
  -最终卷= 200
  -稀释次数= 10
  6.继续转到OT-2运行应用程序，上传您的协议并校准实验室软件。
  7.密封平板，并量化吸光度在450 nm，每针阅读器25睫毛。

结果
图1的frst6柱的平均原始吸光度值如图2所示。每一列显示比前一列稀释1.5倍。方差的一致性（CV%）说明了在重复之间的高可靠性。表1显示了每个稀释板的柱状CV%。每个柱的平均精度约为2%，与使用比OT-2昂贵得多的液体处理器进行的类似实验的值相当1.每个连续稀释板在大约2分钟内在OT-2上完成。

结论
在这里，我们提出了一个简单的连续稀释实验，说明了OT-2液体处理机器人的高精度移液。除了精度外，OT-2还能够进行高度可定制的移液技术。用户可以优化抽吸/分配速度，混合速度，空气间隙和许多其他选项，以更准确和更有效的液体处理。自动连续稀释将为科学家提供可靠的移液系统，以及宝贵的步行时间，从繁琐、容易出错的手工工作。