会议邀请 | 一触即动,精准掌控——全自动移液工作站功能焕新

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使用 Opentrons 移液工作站进行自动化Elisa(酶联免疫吸附试验)

简介
ELISA(酶联免疫吸附实验)是一种被广泛应用于诊断和研究领域的重要测试方法。在这项技术中,确保样本处理的一致性至关重要,而减少人工操作时间则可以有效降低人为误差。我们利用Opentrons OT-2 和 Flex 液体处理工作站,开发并测试了多种自动化协议。通过这些自动化协议,您可以直接使用 ELISA 试剂盒进行实验,也可以根据需要定制特定的实验流程。

方法

检测方法示意图

试剂盒: Takara Fibronectin (FN) EIA Kit
(夹心法ELISA,图1)

  • 仪器: Opentrons OT-2
  • 工作流程:
  1. 加样(靶向捕获)
  2. 洗涤
  3. 加酶标抗体
  4. 洗涤
  5. 加显色底物

检测方法: Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit
(竞争法ELISA,图2)

检测方法示意图
  • 仪器: Opentrons OT-2
  • 工作流程:
  1. 加样(靶向捕获)&标记抗原
  2. 洗涤
  3. 加显色底物

  • 检测方法: Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit
    (竞争法ELISA,图3)
  • 仪器: Opentrons OT-2
  • 工作流程:
  1. 加样(靶向捕获) & 标记ACE2
  2. 洗涤
  3. 加显色底物
检测方法示意图
  • 检测方法: SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads
    (磁珠式ELISA, 图4)
  • 仪器: Opentrons OT-2 & 磁力架模块
  • 工作流程:
  1. 加样(靶向捕获)
  2. 洗涤
  3. 加酶标抗体
  4. 洗涤
  5. 加显色底物
检测方法示意图
ELISA 板设计
图5

检测:细胞因子检测的测定方法开发(夹心法 ELISA,图 5 )
仪器: Opentrons Flex
工作流程:
1 .ELISA 板准备
2.洗涤
3.加样(靶向捕获)
4.洗涤
5.加酶标抗体
6.洗涤
7.加底物显色

结果

结果显示图

图 6. Takara Fibronectin (FN) EIA Kit(图 1 )。对FN样品进行梯度稀释并检验,检验结果如图所示:
左图为FN样品浓度和平均吸光度(n=3)数据,呈高度线性回归;右图为3次重复实验结果,呈现良好
的重复性和稳定性。

结果显示图

图 7. Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit (图 2 )。对皮质醇样品进行梯度稀释并检验,检验结果如图
所示:左图为皮质醇样品浓度和平均吸光度(n=3)数据,呈高度线性回归;右图为3次重复实验结
果,呈现良好的重复性和稳定性。

图 8. Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate(图 3 )。检验结果表明,阳性的人血清样本(
之前已通过 FDA 认证的 ELISA 实验检测结果为阳性),在该测试中呈现结果为阳性(抑制率 >
20%,计算公式:抑制率 = [1 - (样本的OD450值 / 阴性对照的OD值)] x 100% ,n = 3)。

图 9. SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads(图 4 )。对重组中和抗体样品进
行梯度稀释并检验。检验结果表明,阳性的人血清样本(之前已通过 FDA 认证的 ELISA 实验
检测结果为阳性),在该测试中呈现结果为阳性(n = 3)(右)。

图 10. Assay Development for Cytokine Detection(图 5 )。在 96 孔板涂覆抗 TNF-alpha
抗体和抗IFN-gamma抗体,对含有细胞因子的样品进行ELISA检测,数据如图所示
(n=6)。

结论

  • 该工作站可以用于执行从加抗体/抗原到加显色底物的完整 ELISA 流程
  • 结果表明样本处理的一致性高(变异系数<10%)、准确性高(R-squared>0.99),重复性
    好。
  • 以 SARS-CoV-2 抗体检测为例,基于 96 孔板的商用试剂和基于磁珠的自制 ELISA 试剂均可
    实现全自动化处理,且结果与 FDA 认证的 Elisa 方法测定结果一致。
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