使用 Opentrons 移液工作站进行自动化Elisa（酶联免疫吸附试验）

简介
ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种被广泛应用于诊断和研究领域的重要测试方法。在这项技术中，确保样本处理的一致性至关重要，而减少人工操作时间则可以有效降低人为误差。我们利用Opentrons OT-2 和 Flex 液体处理工作站，开发并测试了多种自动化协议。通过这些自动化协议，您可以直接使用 ELISA 试剂盒进行实验，也可以根据需要定制特定的实验流程。

方法

试剂盒: Takara Fibronectin (FN) EIA Kit
（夹心法ELISA，图1）

• 仪器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加样（靶向捕获）
2. 洗涤
3. 加酶标抗体
4. 洗涤
5. 加显色底物

检测方法: Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit
（竞争法ELISA，图2）

• 仪器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加样（靶向捕获）&标记抗原
2. 洗涤
3. 加显色底物

• 检测方法: Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit
  （竞争法ELISA，图3）
• 仪器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加样（靶向捕获） & 标记ACE2
2. 洗涤
3. 加显色底物

• 检测方法: SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads
  (磁珠式ELISA, 图4)
• 仪器: Opentrons OT-2 & 磁力架模块
• 工作流程:

1. 加样（靶向捕获）
2. 洗涤
3. 加酶标抗体
4. 洗涤
5. 加显色底物

检测：细胞因子检测的测定方法开发（夹心法 ELISA，图 5 ）
仪器: Opentrons Flex
工作流程:
1 .ELISA 板准备
2.洗涤
3.加样（靶向捕获）
4.洗涤
5.加酶标抗体
6.洗涤
7.加底物显色

结果

图 6. Takara Fibronectin (FN) EIA Kit（图 1 ）。对FN样品进行梯度稀释并检验，检验结果如图所示:
左图为FN样品浓度和平均吸光度（n=3）数据，呈高度线性回归；右图为3次重复实验结果，呈现良好
的重复性和稳定性。

图 7. Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit （图 2 ）。对皮质醇样品进行梯度稀释并检验，检验结果如图
所示：左图为皮质醇样品浓度和平均吸光度（n=3）数据，呈高度线性回归；右图为3次重复实验结
果，呈现良好的重复性和稳定性。

图 8. Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate（图 3 ）。检验结果表明，阳性的人血清样本（
之前已通过 FDA 认证的 ELISA 实验检测结果为阳性），在该测试中呈现结果为阳性（抑制率 >
20%，计算公式：抑制率 = [1 - (样本的OD450值 / 阴性对照的OD值)] x 100% ，n = 3）。

图 9. SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads（图 4 ）。对重组中和抗体样品进
行梯度稀释并检验。检验结果表明，阳性的人血清样本（之前已通过 FDA 认证的 ELISA 实验
检测结果为阳性），在该测试中呈现结果为阳性（n = 3）（右）。

图 10. Assay Development for Cytokine Detection（图 5 ）。在 96 孔板涂覆抗 TNF-alpha
抗体和抗IFN-gamma抗体，对含有细胞因子的样品进行ELISA检测，数据如图所示
（n=6）。

结论

• 该工作站可以用于执行从加抗体/抗原到加显色底物的完整 ELISA 流程
• 结果表明样本处理的一致性高（变异系数<10%）、准确性高（R-squared>0.99），重复性
  好。
• 以 SARS-CoV-2 抗体检测为例，基于 96 孔板的商用试剂和基于磁珠的自制 ELISA 试剂均可
  实现全自动化处理，且结果与 FDA 认证的 Elisa 方法测定结果一致。