Opentrons Flex 功能模组介绍：热循环模块

• 可编程，支持全自动PCR流程

• 温控模组的温度范围4 – 99°C，上盖温度可达110°C

• 可以使用Protocol Designer和Python Protocol API进行编程

Opentrons 对热循环模组 GEN2 进行了一系列严格的性能测试,以保障仪器品质遵守行业标准的性能规范。表1.在稳定状态下温度的一致性和准确度测试结果。在5个目标温度下，对装有液体体积为20μL和100 L的8个不同的热循环模组进行一致性和准确性评估。在每个目标温度下，热循环模组的一致性和准确度的结果都在预期的范围内。

表1.在稳定状态下温度的一致性

温度升降速率(变温率)

对8个不同的仪器在加热(到 99°C)和冷却(到4°C)期间测量其平均最大温度升降速率。每个定点的保持时间为5分钟。热循环仪的最大平均变温率为 4.45°C/s(图1)

图 1.变温速率测试结果

为了测试仪器的扩增一致性，我们采用了可重复使用的密封元件和96孔PCR板，对多种反应体系进行了测试。使用Lambda引物对Lambda DNA进行扩增，热循环条件为：94°C预变性10分钟，随后25个循环，每个循环包括94°C15秒、70°C1分钟的变性和退火，以及72°C7分钟的延伸。

通过读取原始荧光值，我们对每个孔的扩增量进行了测量，并计算了变异系数（CV%），结果见表2。数据显示，密封元件可重复使用多达25次而不影响性能，无论是10μL还是100μL的反应体积，CV值均保持较低。此外，使用OT-2 96孔PCR板，即使在10μL至100μL的较大体积范围内，热循环模组也展现出良好的扩增重复性。

表2.放大一致性的结果

低蒸发率

为了评估50个不同热循环模组的蒸发率，我们使用PCR 96孔板进行了测试，样品体积包括10μL、20μL、50μL和100μL。在PCR的三个阶段（变性、退火、延伸）前后，我们测量了样品的体积重量，共进行了35个循环，每个循环的温度和时间设置为：94°C（10秒）、70°C（30秒）和72°C（30秒）。

测试结果表明，所有样品体积的平均蒸发率均低于6%，而最大样品体积（100μL）的平均蒸发率更是低于1%（详见图2）。这些数据验证了Opentrons热循环模组GEN2的稳定性和可靠性，样品体积损失最小化，确保了实验的一致性和准确性。无论是使用一次性密封圈、多种反应体积，还是在机制备样品的情况下，96孔板的扩增效果均显示出一致性和均匀性。经过一系列测试，Opentrons热循环仪GEN2的96孔位PCR证明了其能够提供可重复和精确的扩增结果，是实验室日常实验的理想选择。

图 2.蒸发测试结果