流式细胞仪样品制备

什么是流式细胞术？

流式细胞术是一种基于激光的复杂技术，用于评估细胞表面和细胞内分子的表达。它是研究和诊断的核心，它能够同时对单个细胞进参数分析，有助于表征混合群体中的不同细胞类型，并可以测是细胞大小和体积。流式细胞术测定可确定分离的细胞亚群的纯度，甚至对不同的细胞群进行分类，这一过程称为荧光激活细胞分选(FACS)。这是通过检测用针对细胞蛋白或配体(如与 DNA 连接的碘化丙啶)的荧光抗体标记的细胞发出的荧光强度来实现的。

什么是流式细胞仪？

根据其配置和预期应用，流式细胞仪可具有各种组件和功能，包括：

• 流体系统: 该系统以单列方式运输细胞，确保每次只有一个细胞通过激光束进行分析。
• 激光器: 用于在细胞穿过光束时照亮细胞。根据细胞仪的配置，可能会有多个不同波长的激光器，以便同时检测多个荧光标签。
• 光学系统: 该系统检测散射光和荧光。它包括镜头和滤光片，以确保检测到适当的光。
• 检测器：将光信号转换为电子信号，常见的检测器包括用干前向散射(FSC)的光电二极管和用干侧向散射(SSC) 和荧光的光电倍增管(PMT）。
• 电子系统: 解释从探测器接收到的信号并将其转换为可以可视化和分析的数据点。

流式细胞术样品制备方法

流式细胞术的样品制备包括创建单细胞悬浮液(通常来自细胞培养物或组织样本)，然后将这些细胞与未标记或荧光团标记的抗体一起孵育。以下是一些常见的 FC 样品制备方法：

• 密度梯度离心: 该方法用于从血液等异质样本中分离特定细胞群，例如淋巴细胞。
• 直接免疫荧光染色: 用荧光染料结合的抗体直接对细胞进行染色。
• 间接免疫荧光染色: 首先用未结合的一抗对细胞进行染色，然后用识别一抗的荧光素结合的二抗对细胞进行染色。

流式细胞术样品制备为何如此闲难：

• 细胞活力:在制备过程中维持细胞健康和活力至关重要，但也很有挑战性。
• 染色特异性:确保荧光标记或抗体特异性结合，没有非特异性染色或（背）景荧光。
• 样本异质性:处理混合多种细胞类型或状态的样本会使制备过程复杂化。

与手动移液相比，流式细胞仪样品制备自动化的优势如下：

• 一致性: 自动化确保均匀的样品处理，减少差异性并提高可重复性。
• 效率: 自动化系统可以同时处理多个样本，简化准备过程。
• 减少样品损失: 自动化设备可以更精确地处理样品，从而最大限度地减少损失。
• 可靠性: 自动化减少人为错误并确保样品制备的标准化方法。