C18色谱柱的使用方法

C18色谱柱全称十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，是一种反相色谱柱。其中“C18”指的是固定相的化学结构，即色谱柱填料为十八烷基硅烷键合相，这种色谱柱的固定相是通过化学键合的十八烷基官能团吸附在硅胶基质上的。C18色谱柱的原理是基于化合物在C18填充物表面上的亲疏水性差异，通过溶剂梯度洗脱来实现化合物的分离。具体来说，非极性载体表面具有疏水特性，能够吸附非极性化合物，而偏极性的流动相中通常包含有机溶剂和缓冲液，其极性较高，在分离中发挥重要作用。

C18色谱柱的使用方法

一、新柱活化
1、冲洗：新柱子在使用前需用纯有机试剂（如甲醇、乙腈）低流速冲洗，冲洗体积以20倍柱体积为宜，以便固定相能充分润湿、碳链能舒展，使色谱柱的性能达到最佳状态。
2、防脱壳处理：将新柱浸入纯甲醇或乙腈溶液中，旋转或以其它方式使其表面完全接触至少30分钟。洗去大部分残留有机物之后，用纯水或75%甲醇或乙腈冲洗2~3次直到输出液为无色无味。
3、酸碱洗处理：在防脱壳处理完成后，使用0.11%的醋酸溶液滴于色谱柱表面并停留约30分钟，并彻底用DI水冲洗干净。然后采用0.11%的氨水溶液吸附含氨基的样品于柱子上并停留约30分钟，之后再次用DI水推出至输出稳定。
4、梯度洗脱：加入摩尔比1:1的异丙醇和甲酸制成的混合液进柱子中，在流速为0.5 mL/min的条件下梯度洗脱（10% B，3min；40% B，3min；95% B，3min，重置至10%过渡三分钟），使其开放性自由胶体的更快恢复。

二、日常使用
1、样品处理：确保样品经过适当处理，去除杂质和干扰物质，以提高分离效果。
2、流动相选择：根据实验要求选择合适的流动相组成和比例。
3、流速控制：控制适当的流速，避免过高或过低的流速影响分离效果。
4、压力监测：在使用过程中，注意监测色谱柱的压力变化，及时发现并处理异常情况。

三、维护
1、冲洗色谱柱：每日实验结束后，应冲洗色谱柱，尤其是流动相中含有酸或盐时，需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净，通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积。
2、避免高水相条件：由于C18柱（极性改性处理的除外）的固定相疏水性较强，在使用过程中尽量不要使用高水相条件，若水相比例过高，易引起固定相疏水塌陷，导致柱效迅速下降，甚至造成不可逆的负面影响。建议使用过程中水相比例不超过90%。
3、再生处理：当色谱柱压力升高、柱性能下降时，通常为色谱柱被污染，对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效。

四、长期保存
1、冲洗：长期保存前要将色谱柱冲洗3~4小时以上。
2、保存溶剂：保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液（如90%甲醇水）中。若第二天需继续使用，日常保存溶剂也尽量与此相同。

五、注意事项
1、避免剧烈振动：以免损坏色谱柱。
2、防止干燥：长期不使用时，应确保色谱柱内充满适当的溶剂，并封好两端堵头，以防止干燥和污染。
3、使用寿命：C18色谱柱的使用寿命大约为100~200次，当输出结果的峰形变得模糊、输出稳定性下降时，请及时更换新柱。

六、常见问题与解决方案
1、盐析问题：在使用C18色谱柱时，可能会出现盐析现象。这通常是由于流动相中的盐类物质在色谱柱中析出所致。为了解决这个问题，可以采取优化流动相组成、使用耐高盐的比例阀或加装柱温箱等措施。

2、色谱柱堵塞：色谱柱堵塞是另一个常见问题。这可能是由于流动相中的杂质、样品中的不溶性物质或缓冲盐类物质在色谱柱中沉积所致。为了解决这个问题，可以采取使用高水相进行冲洗、使用保护柱或柱前过滤器等措施来防止堵塞的发生。如果色谱柱已经堵塞，可以尝试使用反冲或超声清洗等方法进行恢复。但请注意，柱芯和某些类型

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