BCA(二喹啉甲酸)法

需要进行 BCA 法的工作流程：

• 蛋白质纯化过程，以确定产量和纯度。
• 凝胶电泳前，确保蛋白负载量相等。
• 蛋白质标记或修饰前，确保使用了正确量的蛋白质。
• 细胞培养研究中，确定蛋白质表达水平。

BCA 检测的最佳方法

标准 BCA 法

最适合蛋白质浓度范围在测定线性范围内、样品数量适中的常规应用。

1. 样品制备： 首先收集和制备蛋白质样本，确保样本中不含干扰物质。
2. 制备 BCA 工作试剂： 这通常包括将 BCA 溶液与硫酸铜（II）溶液按特定比例混合，通常由检测试剂盒制造商提供。
3. 混合与孵育： 通常在比色皿或试管中将蛋白质样品加入 BCA 工作试剂。通常在 37℃下孵育混合物 30 分钟。
4. 测量： 孵育结束后，使用分光光度计在 562 nm波长处测量每个样品的吸光度。
5. 分析： 将吸光度值与标准蛋白质（通常是牛血清白蛋白 (BSA)）的吸光度值进行比较，以确定样品的蛋白质浓度。

微孔板 BCA 法

非常适合需要同时分析许多样品的高通量筛选。它的试剂使用效率高，常用于大型研究或工业环境。

1. 样品制备： 与标准检测一样，首先制备蛋白质样品。
2. BCA 工作试剂： 制备相同的试剂，但要根据微孔板孔调整体积。
3. 分装和孵育： 使用多通道移液器将蛋白质样品和 BCA 工作试剂分装到 96 孔板的孔中。通常在 37℃ 孵育 30 分钟。
4. 测量： 使用微孔板阅读器在 562 nm波长处测量吸光度。
5. 分析： 与标准方法一样，使用标准曲线确定蛋白质浓度。

针对含去垢剂样品的改良 BCA 法

专门用于含有去垢剂的样本，因为去垢剂会干扰 BCA 反应。这种情况常见于从某些细胞类型或组织中提取蛋白质，或研究包埋在膜中的蛋白质时。

1. 样品制备： 提取样品中的蛋白质，注意去垢剂的浓度。
2. BCA 工作试剂： 按标准检测方法配制。
3. 添加洗涤剂相容性试剂： 这些试剂通常在专门的 BCA 试剂盒中提供，添加这些试剂是为了消除去垢剂的干扰作用。
4. 混合与孵育： 与标准测定一样，混合样品和工作试剂并孵育。
5. 测量与分析： 使用分光光度计测量吸光度，并通过标准曲线确定蛋白质浓度。

如何实现 BCA 法的自动化：

• 液体处理工作站： 这些机器设计用于自动将液体移液到指定容器中，确保准确性和一致性。
• 集成系统： 有些平台集成了从样品添加到读取吸光度的整个过程，从而简化了工作流程。
• 软件： 自动化软件可用于设置协议，确保每次检测都以相同的方式进行。

与手动移液相比，自动化 BCA 法的优势：

• 一致性： 自动化可确保每次都以相同的方式执行每个步骤，从而减少可变性。
• 效率： 自动化系统可同时处理多个样本，加快处理速度。
• 准确性： 自动移液减少了体积错误和交叉污染的风险。
• 数据完整性： 自动化系统通常配有集成的数据管理解决方案，可确保正确记录和存储结果。