Opentrons Flex 自动化 NGS 文库制备常见问题解答

随着高通量测序在科研与临床中的应用不断扩大，NGS 文库制备的自动化需求也越来越明显。Opentrons Flex 作为新一代实验室自动化平台，被广泛用于 DNA、RNA 及多种文库构建流程中。在实际使用过程中，不少实验人员在配置、运行和优化流程时会遇到一些共性问题。本文围绕 Opentrons Flex 自动化 NGS 文库制备的常见疑问进行系统解答，帮助用户更高效地开展实验。

移液工作站

Opentrons Flex 是否适合所有 NGS 文库类型

Opentrons Flex 具备较高的流程兼容性，能够覆盖常见的 DNA 文库、RNA-seq 文库、靶向捕获文库以及部分单细胞相关前处理步骤。通过灵活的模块组合和 Python 协议编程，用户可以根据不同试剂盒调整移液参数和流程逻辑。不过，对于步骤极为复杂或对时间、温度要求极端精细的特殊文库类型，仍需在上机前进行充分验证，以确保自动化效果与手工操作一致。

自动化文库制备的重复性如何保障

重复性是衡量自动化系统价值的重要指标。Opentrons Flex 在移液精度、吸头一致性以及动作稳定性方面表现突出，有助于降低人为操作差异。要进一步提升重复性，实验中应重点关注试剂预混均匀度、板位布局是否合理，以及是否为不同体积范围设置了对应的移液参数。通过标准化 protocol 和耗材配置，多批次文库的一致性通常优于人工操作。

Flex 平台对磁珠纯化步骤是否友好

磁珠纯化是 NGS 文库制备中的关键环节。Opentrons Flex 可搭配磁力模块完成结合、洗涤与洗脱等步骤，适用于 AMPure XP 等常见磁珠体系。在使用过程中，需要特别注意磁吸时间设置、残液处理以及洗脱体积控制。合理延长磁吸静置时间，并在协议中加入缓慢移液动作，有助于减少磁珠损失，提高回收率。

样本通量提升是否会影响文库质量

Flex 平台支持从低通量到中高通量的灵活扩展，在 96 孔板格式下可显著提升处理效率。只要 protocol 设计合理，样本通量的增加并不会对文库质量造成负面影响。相反，自动化在高通量场景下更能体现优势，有效避免人工疲劳带来的操作偏差。关键在于提前评估实验规模，并对移液速度、混匀次数进行相应调整。

新手上手 Opentrons Flex 是否困难

对于没有自动化经验的实验人员而言，Opentrons Flex 的学习曲线相对友好。官方提供的图形化界面和示例 protocol 能帮助用户快速理解流程逻辑。具备基础 Python 知识的用户还可以进一步定制复杂流程。建议新用户从成熟的文库制备方案入手，通过小规模测试逐步熟悉平台特性，再扩展到正式实验。

自动化流程是否需要频繁维护与校准

Opentrons Flex 日常维护需求相对较低，但定期校准仍然是保证结果稳定的重要前提。常规维护包括移液通道校准、模块功能检查以及耗材兼容性确认。在高频使用环境中，建立简单的维护记录制度，有助于及时发现潜在问题，减少实验中断风险。

结语

Opentrons Flex 为 NGS 文库制备提供了一种高效、稳定且可扩展的自动化解决方案。通过合理的 protocol 设计与规范化操作，可以有效提升实验重复性和通量，同时降低人工成本。对于计划引入自动化的实验室而言，充分理解常见问题并提前做好验证，是发挥 Opentrons Flex 平台优势的关键一步。

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