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在使用 Opentrons Flex NGS 工作站处理 48 样本的实验流程中,优化板位布局是提升实验效率、保障实验准确性的关键环节。合理的板位布局能够减少移液路径、避免交叉污染,充分发挥工作站的自动化优势。以下将从遵循实验流程逻辑、考虑移液器操作特点、规避潜在干扰因素等方面,详细介绍优化板位布局的方法。
一、遵循实验流程逻辑规划板位
确定关键实验步骤顺序:以常见的 NGS 文库制备流程为例,一般包含样本裂解、磁珠纯化、PCR 扩增等步骤。在布局板位时,应按照这些步骤的先后顺序,将对应的耗材和试剂放置在相邻或易于操作的位置。比如,将装有样本的 96 孔板放置在靠近工作站入口且方便移液器取液的位置,作为起始操作点。随后,将用于样本裂解的试剂槽就近放置,使移液器能够快速在样本孔板和试剂槽之间移液,完成裂解液添加操作,减少移液行程,提高实验效率。
整合同类操作耗材:对于涉及多次重复相同操作的步骤,将相关耗材集中放置。在磁珠纯化过程中,磁珠储存管、清洗液试剂槽以及用于收集洗脱液的孔板应紧密排列。这样,96 通道移液器在进行多轮磁珠吸附、清洗、洗脱操作时,无需频繁更换移液路径,能够高效地对多个样本同时进行处理,降低操作复杂度,减少因操作不当导致的误差。
二、依据移液器特性安排板位
适配移液器类型与通道数:Opentrons Flex NGS 工作站配备多种移液器,如 2x8 通道移液器和 96 通道移液器。若使用 2x8 通道移液器处理 48 样本,可将样本孔板按每 8 个样本一组进行划分,对应移液器的 8 个通道,将每组样本孔板放置在移液器一次操作能够覆盖的区域内,确保移液器的每个通道都能准确、高效地吸取和分配液体。对于 96 通道移液器,虽然处理 48 样本时无需全部通道工作,但仍要保证孔板放置位置能使移液器轻松对准样本孔,避免出现通道与孔位不匹配或移液偏差的情况。
考虑移液器移液范围与精度:不同量程的移液器在移液精度上存在差异。在板位布局时,将需要高精度移液的操作(如添加珍贵的酶试剂、进行微量体积的样本转移)对应的耗材放置在移液器精度较高的工作区域。一般来说,移液器在接近其最大量程的 10% - 90% 范围内移液精度较高。例如,对于 1 - 50µL 量程的移液器,在处理 10 - 45µL 体积的液体转移时精度更有保障,可将相关试剂瓶或样本孔板设置在该移液器执行此类移液操作最便捷的位置,以确保实验中关键液体量的准确性。
三、规避干扰与提高操作便利性
减少交叉污染风险:为防止不同样本、试剂之间发生交叉污染,在板位布局上要严格区分不同功能区域。将阳性对照样本、阴性对照样本与实验样本的孔板分开摆放,且保持一定距离,避免移液器在操作过程中因意外导致液体飞溅而造成交叉污染。同时,对于使用过的吸头丢弃区和废液收集区,应设置在远离样本和试剂的位置,且要有明显标识,确保工作站机械臂在丢弃吸头和倾倒废液时不会对其他实验操作产生干扰。
优化操作空间与机械臂移动路径:充分考虑工作站内部机械臂、移液器等组件的移动空间,避免在板位布局上出现耗材或设备相互阻挡的情况。确保机械臂在抓取、移动孔板以及移液器进行移液操作时,能够顺畅运行,不受阻碍。例如,不要将体积较大的试剂瓶放置在机械臂移动路径上,以免发生碰撞,影响实验进程。同时,合理安排板位高度,使移液器在不同高度的耗材之间移液时,能够以最短的垂直行程进行操作,减少能耗和操作时间。
通过遵循实验流程逻辑、依据移液器特性以及规避干扰因素等多方面优化板位布局,Opentrons Flex NGS 工作站在处理 48 样本时能够显著提升实验效率、保障实验结果的准确性和可靠性,为科研工作者在 NGS 实验中提供有力支持。
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