快速检测微生物的方法规范

随着制药和生物科技行业不断创新来满足患者对疗法的需求，新型疗法的发展步伐也在日益加快。业界已经见证了创新带来的累累硕果，例如细胞疗法和基因疗法，它们为无数的患者带来了康复的希望。然而，许多此类疗法都需要2-4天的周转时间来确保治疗的有效性。就减小此过程期间发生污染的风险而言，平板计数法等传统微生物检测方法力有不逮，因为其培养期至少需要5天才能获得结果，检测能力较低，且实际微生物水平易被低估。

新过程控制策略
平板计数法的这些局限性已迫使人们重新思考控制策略，以确保过程始终处于控制之下，从而减小发生污染的风险。快速微生物检测方法(RMM)，包括过程所用之水，是这种整体过程控制策略的关键。虽然平板计数法可以在培养期结束时确认水质，但利用RMM的测量结果而知晓过程处于控制之下却使业界能够最大限度地减小在所需周转时间内放行产品的风险。然而，在完全采用此类RMM之前，业界一直在寻求监管机构给出他们的观点和指导。另一方面，监管机构则意识到，创新疗法的需求要求在原材料的制造、加工和监测方面进行创新。在批准这些创新疗法后，监管机构希望确保患者的安全不会在疗程中受到损害。他们还意识到当前经验证微生物检测方法的局限性，并已表示他们对将其他技术和方法视为整体过程控制策略的一部分持开放态度。尽管并非全世界的所有监管机构和药典都已对这些关切作出回应，但各种监管机构和药典之间的协调进程表明，随着业界采取全球供应视角来看待问题，这种开放性将在全球范围内得到体现。

美国药典（USP）
USP已意识到传统平板计数法的局限性。在第<1223>章中，它以各种表述专门地提及了这些局限性，如下所示：
• “有关从饮用水和环境水中回收微生物的研究已经表明，将细胞计数估计值报告为菌落形成单位(CFU)的传统平板计数法可以回收样本中0.1-1％的实际微生物细胞。”
• “如果提供给微生物的生长、营养或培养条件不足以促成菌落恢复和菌落生长，那么即使存在活细胞，结果也可能是0 CFU或无生长。”考虑到这一点，USP鼓励将其他测量方法和技术视为整体控制策略的一部分。其中包括：
• 激光诱导细胞荧光技术
• 通过固相和流体荧光显微镜检测重要染色细胞
• 通过生物发光测量ATP水平
这些方法都是RMM，它们可以通过立即检测任何超标来更快地对任何微生物污染事件作出响应。尽管平板计数法是目前唯一经过验证的用水放行方法，USP和FDA仍鼓励用户使用融合了其他技术的整体过程控制方法。USP <1223>中还提供了统计方法，它们可以在为此类替代测量信号设置基线和报警限值时使用。

欧洲药品管理局（EMA）
EMA已旗帜鲜明地表示鼓励将RMM视为整体过程控制的一部分。EMA在GMP附录1“关于注射用水生产的常见问题解答”中强调了这一立场，并给出了如下声明：
• “应将替代/快速微生物检测方法的使用作为系统整体控制策略的一部分。”
• “应将快速微生物检测方法的使用视为控制策略的一部分，以便为针对系统劣化作出快速响应提供帮助。”
通过如此明确的关于如何在整体过程控制中利用RMM的声明，EMA鼓励用户不要单纯依赖于平板计数法。需要再次指出的是，虽然平板计数法仍是目前唯一经过验证的用水放行方法，但其他方法的验证也正在研究中，EMA将继续鼓励用户将RMM纳入整体过程控制中。

联邦药品管理局（FDA）
如之前所述，监管者们已意识到，传统的平板计数法不够迅速，因此某些已批准的疗法需要重新思考过程控制策略。鉴于FDA调查人员通常处于执行工厂审查的第一线，业界热切希望听到FDA就RMM及其在过程中的使用亮明态度。FDA的认可对充分证明业界实施RMM的正确性而言至关重要。

在（美国）贝塞斯达举行的第14届PDA全球药用微生物学年度大会上的“专家答疑”环节期间，FDA代表被问到：“如果我仍在对用水系统进行传统的平板计数，但我希望同时运行新的RMM做比对，那么为什么我需要对其进行验证？这种额外的方式会出现什么问题？”
作为回应，FDA专家组坦言十分欢迎这项技术，并表示PAT倡议鼓励在采用传统的经验证方法的同时，使用互补的快速微生物检测方法以进行整体过程控制。FDA澄清道，就鼓励新技术以满足业界的需求而言，这是PAT倡议的初衷。只要使用经验证的方法来放行用水，那么当用户探索能更好地控制其过程的方法时，它就可以在实质上为用户提供“避风港”。
这清楚地表明了FDA对RMM的态度。FDA承认RMM与其PAT倡议一致，该倡议旨在实现更好的过程控制并减少对过程采集样本的依赖，采集样本只有在产品已经受到影响时才会揭示问题。
为了进一步明确FDA的立场，一个独立的过程和环境检测方法(PEMM)协作工作组与FDA的新兴技术团队进行了会谈，共同探讨RMM。PEMM的成员包括许多主要制药行业利益相关者以及与RMM有关的供应商。工作组说明了激光诱导荧光(LIF)技术的优势，并要求FDA就将该技术用作过程控制工具给出立场声明。LIF是7000RMS™分析仪中的核心技术。

关于使用快速微生物检测方法的监管意见总结

• USP和EMA鼓励使用快速微生物检测的替代性测试方法以进行过程控制
• USP更是强调了将激光诱导细胞荧光技术（即7000RMS中的核心技术）用作细胞枚举的替代方法之一
• FDA鼓励在采用传统的经验证方法的同时，将互补的快速微生物检测方法用作过程控制的一部分。
• 这些方法与PAT倡议的初衷一致

在回应中，FDA公开支持将该技术(LIF)作为与担当第一步的传统平板计数法并行使用的过程控制工具。这强调了他们在PDA大会上的回应，他们曾在大会上鼓励将RMM用作对平板计数法等传统经验证方法的补充。此外，与采集样本相比，RMM系统能够以高于传统方法的灵敏度连续监测水中的微生物总量。使用数据趋势预测和分析功能的连续微生物监测能够提供实时验证，而实时验证则可以用于改善整体过程了解和过程控制。
此外，随着实时微生物技术越来越广泛地用作过程控制工具，FDA表示愿意讨论各种方法，以证实该技术可以用作当前经验证方法的潜在替代方案。PEMM工作组和其他业界组织将继续同FDA合作来定义这些验证程序，从而使RMM可以用作经验证的方法。然而，在此之前，FDA鼓励将RMM用作与传统平板计数法并行的过程控制工具。

越来越多的认可和鼓励
各种机构作出的声明和回应清楚地表明，RMM可以在整体过程控制策略中发挥重要作用。监管机构鼓励将它们与平板计数法等经验证的方法并行使用，以便过程得到主动监测且用户能够对超标快速作出回应，从而防止污染事件。这种对RMM的认可对满足不断增长的创新疗法需求而言至关重要，因此业界应适应其过程以满足要求。

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符合全球法规要求
监管机构鼓励使用替代性的快速微生物学方法。