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Flex Prep
NEST 2 mL 96 深孔板, V 底
NEST 96 孔板, 平底
NEST 单孔储液槽, 195 mL
NEST 12 孔储液槽, 15 mL
OT-2 32 孔管架, 15mL
Opentrons 0.2 mL 96孔 PCR硬板, 全裙边
NEST 50 mL 离心管
NEST 15 mL 离心管
NEST 2.0 mL 离心管
NEST 1.5 mL 离心管
四合一离心管架
铝合金管架
OT-2 过滤吸头, 200µL
OT-2 过滤吸头, 1000µL
OT-2 吸头, 20µL
OT-2 吸头, 300µL
OT-2 吸头, 1000µL
OT-2 过滤吸头, 20µL
Opentrons Flex 96-Channel Tip Rack Adapter
Opentrons Flex 吸头, 50 µL
Opentrons Flex 吸头, 200 µL
Opentrons Flex 吸头, 1000 µL
Opentrons Flex 过滤吸头, 50 µL
Opentrons Flex 过滤吸头, 1000 µL
Opentrons Flex 过滤吸头, 200 µL
蛋白质分离纯化的步骤是一个复杂但精细的过程,旨在从复杂的生物样品中提取并纯化出单一的目标蛋白质。这些步骤通常包括样品制备、初步分离、细分离、纯度分析和精制等几个关键阶段。接下来,我们将详细阐述每一步骤的目标及其具体操作方法:
一、样品制备
1、目标:将含有目标蛋白质的样品进行处理,去除杂质,使蛋白质溶解并稳定。
2、方法:
1>细胞破碎:采用机械破碎法(如高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等)、渗透破碎法、反复冻融法、超声波法或酶法等方法将细胞或组织破碎,释放蛋白质。
2>离心、过滤:去除细胞碎片、不溶性物质等杂质,得到较为纯净的蛋白质溶液。
二、初步分离
1、目标:根据蛋白质的物理和化学性质,选择合适的分离方法,初步分离出目标蛋白质。
2、方法:
1>离子交换层析:根据蛋白质的电荷性质进行分离。
2>疏水作用层析:根据蛋白质的疏水性进行分离。
3>亲和层析:利用蛋白质与特定配体的特异性结合进行分离。
4>等电点沉淀法:利用蛋白质在等电点时溶解度最低的原理进行分离。
5>盐析法:在蛋白质溶液中加入大量中性盐,使蛋白质沉淀析出。
三、细分离
1、目标:对初步分离得到的蛋白质进一步纯化。
2、方法:
1>凝胶过滤层析(分子排阻层析):根据蛋白质的分子大小进行分离。
2>高效液相色谱(HPLC):利用高压将样品通过固定相,根据蛋白质的亲和性进行分离。
3>电泳:利用电场作用力,根据蛋白质的电荷和分子大小进行分离。
四、纯度分析
1、目标:对分离纯化后的蛋白质进行纯度分析,确认其纯度。
2、方法:
1>SDS-PAGE电泳:通过比较蛋白质的迁移率,分析纯度。
2>紫外可见光谱:根据蛋白质的吸收光谱,分析纯度。
3>质谱:通过测定蛋白质的分子量,分析纯度。
五、精制
1、目标:根据需要,对纯化后的蛋白质进行浓缩、结晶等处理,以提高纯度和活性。
2、方法:包括透析、超滤、冷冻干燥等技术,以去除多余的盐、缓冲液或其他小分子杂质,同时保持蛋白质的天然活性和稳定性。
蛋白质分离纯化是一个多阶段、多方法的过程,需要根据目标蛋白质的性质和实验需求选择合适的分离纯化策略。每个步骤都至关重要,需要仔细操作和严格控制条件,以确保最终得到高纯度、高活性的目标蛋白质。
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