OT-2海报上THP-1细胞过氧化氢水平的自动测定

测定OT-2上THP-1细胞中过氧化氢水平的自动化分析

瓦苏达SNair博士. 1金纳里·沃森博士11.Optrins实验室公司。

介绍

沙桂油过氧化氢（H2O2)主要与细胞损伤有关；然而，重新生成百美分的研究表明，细胞释放低水平的H2O2作为正常细胞间的一部分高频率多路通信过氧化氢的转运、摄取和释放的机制生物学效应目前还不为人所知，但对癌症、干细胞有重要意义细胞和衰老。
双联体红色试剂是非荧光的基于10-乙酰3,7二羟基苯氧恶嗪的氧化，测定原理简单它是由辣根过氧化物酶（HRP）催化的，在H2O2产生一个红色荧光产物，间苯二酚，化学计量比为1：1。
树脂最终产物具有较高的消光系数这是一种超灵敏的检测方法，只有10皮摩尔的H2O2在一个100 μL的卷中；1×10–5U/mL的HRP。
这些读数可以用分光光度法测量，也可以用荧光读数法测量使用酶标仪，激发530 nm，发射波590 nm。

材料和方法

OT-2，P300单GEN2移液管，P20单GEN2移液管
温度模块设置为23°C，在协议结束时设置为37°C。
THP-1巨噬细胞样细胞（ATCC，Manassas，VA，USA）(No。TIB-202)
无酚红RPMI 1640培养基（热费雪科学11835030）
佛波12-肉豆蔻酸13-醋酸酯（PMA）（Sigma Aldrich P1585-1MG）
胎牛血清（胎牛血清）未热灭活（ATCC，Cat No. 30-2020）
Amplex红色检测试剂盒(Cat No.A22188)，包括a) 5X反应缓冲液b) HRP c) DMSO d) Amplex红色试剂e) 3% H2O2
a)视中心96过滤器尖端架200μL b)96过滤器尖端架20μL c)视中心10管架与猎鹰4 x 50 mL，6 x15mL锥形d)视中心24管架与埃彭多夫1.5 mL安全锁扣帽（两个）

结论

OT-2可以进行测定H的自动化测定2O2在THP-1细胞
OT-2可以以96孔的格式处理中等到高通量的样本数量
OT-2可以模拟人工协议而不损失时间和高度可重复性

讨论

本研究是为了了解像Amplex Red这样自动检测H的可行性2O2在OT-2。H2O2被证明是一种重要的信号分子，负责代谢活性和帮助补酶激活，可以影响细胞形态，并在生长因子的存在下导致增殖。细胞外的
H2O2这里使用的细胞系是人类单核细胞，THP-1。结果表明，H可能依赖于浓度2O2不同PMA环境中的生产速率。H的关系2O2释放速率和PMA浓度可能是在10,25 ng/mL时比基础速率显著增加之后。OT-2已成功用于NGS、IP中的各种实验协议的自动化，从而简化了标准试剂盒和分析协议的使用，可以手动劳动密集型。通过自动化分析步骤，与手动方案相比，观察到一致的检测性能。此外，这还描述了量化过氧化物/过氧化物酶的人工和人工方案之间的移液效率。该协议能够给用户一个小时的实践时间
11分钟，如果需要检测多个不同细胞类型的96孔板，以检测添加或不添加各种兴奋剂或生长因子的过氧化氢水平，这可能是一种有效的方法。

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