오늘날 기술의 빠른 개발로 NGS (차세대 시퀀싱) 기술은 높은 처리량, 높은 효율성 및 높은 정확도로 인해 생의학 연구에서 중요한 위치를 차지했습니다. 최첨단 유전자 시퀀싱 기술로서 NGS는 유전체학, 전 사체 및 기타 분야의 발달을 크게 촉진했을뿐만 아니라 질병의 진단, 치료 및 예방에 대한 강력한 지원을 제공했습니다.
1. DNA 추출 및 품질 검사 1. 2. DNA 추출 : 샘플에서 DNA를 추출하기 위해 페놀 클로로포름 추출 방법, 자기 비드 방법 등과 같은 적절한 추출 방법을 사용합니다. 3. 품질 검사 : DNA의 농도, 순도 및 무결성은 전기 영동, 분광 광도계 등에 의해 검출되어 DNA 품질이 후속 실험 결과의 요구 사항을 충족하도록합니다.
2. 라이브러리 구성 1. DNA를 시퀀서 판독에 적합한 길이 간격으로 나누고 말기 수리, 조각 스크리닝 및 기타 처리를 수행하십시오. 2. 링커 추가 : DNA 단편의 양쪽 끝에 특정 링커 시퀀스를 추가합니다. 3. PCR 증폭 : 링커 서열을 템플릿으로 사용하여, PCR 증폭에 의해 충분한 수의 DNA 라이브러리를 얻었다.
3. 대상 캡처 (선택 사항) 특정 영역 (예 : 전체 엑솜 시퀀싱, 게놈-특이 적 영역 시퀀싱 등)의 시퀀싱 프로젝트에 대한 표적 캡처 기술은 라이브러리로부터 목표 시퀀스를 효율적으로 풍부하게하기 위해 필요하다. 이 단계는 시퀀싱 데이터의 정확성과 깊이를 향상시켜 유전자 또는 관심 영역의 표적화 된 분석을 도와줍니다.
iv. 온-아신 시퀀싱 1 : 시퀀서의 유량 셀에 준비한 라이브러리를로드하여 후속 시퀀싱에 필요한 샘플을 제공합니다. 2. 시퀀싱 반응 : 시퀀서는 합성, 시퀀싱 또는 결찰 및 시퀀싱 방법을 사용하여 라이브러리의 핵산 단편을 시퀀싱합니다. 시퀀싱 공정 동안, 시퀀서는 점차적으로 형광 표지 된 DNTP (Deoxyribonucleoside 트리 포스페이트)를 도입하고 형광 신호를 모니터링함으로써 각 위치의 기본 유형을 결정한다. 3. 이미지 캡처 및 데이터 분석 : 고해상도 카메라를 사용하여 형광 신호의 이미지를 캡처 한 다음 생물 정보학 소프트웨어를 통해 이미지 및 시퀀싱 데이터를 처리하고 분석하여 완전한 시퀀싱 결과를 얻습니다.
5. 데이터 분석 1. 2. 2 차 분석 : 기본 품질 스코어링, 시퀀스 정렬, 변동 감지 및 기타 단계를 포함하여 주로 기기에 의해 자동으로 완료됩니다. 3. 3 단계 분석 : VCF 파일의 처리와 관련이 있으며, 최종 시퀀싱 결과 및 생물학적 중요성을 얻기 위해 유전자 주석, 변형 필터링 등과 같은 개인화 된 조정 일 수 있습니다.
6. 결과 해석 및 보고서 데이터 분석 결과를 바탕으로 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP), 삽입 또는 삭제 (Indel), 구조적 변화 등과 같은 시퀀싱 데이터의 변형 정보를 해석하여 관련 데이터베이스 및 문헌 정보를 조합하여 설명 및 생물학적 중요성에 대한 보고서를 제공합니다.
NGS 실험 프로세스는 복잡하고 상세한 프로세스로 DNA 추출, 라이브러리 구성, 대상 캡처 (선택 사항), 데이터 분석에 대한 컴퓨터 시퀀싱 등의 여러 링크를 다루는 복잡하고 상세한 프로세스입니다. 각 단계는 중요하며 시퀀싱 결과의 정확성과 신뢰성을 보장하기 위해 엄격한 기술 운영 및 품질 관리가 필요합니다.
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