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今日のテクノロジーの急速な発展に伴い、NGS(次世代シーケンス)テクノロジーは、スループットが高い、効率が高く、精度が高いため、生物医学研究の重要な地位を占めています。最先端の遺伝子シーケンス技術として、NGSはゲノミクス、トランスクリプトーム、およびその他の分野の開発を大幅に促進しただけでなく、疾患の診断、治療、予防に対する強力なサポートも提供しました。
1 DNA抽出と品質検査 1。 2。DNA抽出:フェノールクロロホルム抽出法、磁気ビード法などの適切な抽出方法を使用して、サンプルにDNAを抽出します。 3。品質検査:DNAの濃度、純度、および完全性は、電気泳動、分光光度計などによって検出され、DNAの品質がその後の実験結果の要件を満たすようにします。
2つのライブラリ構造 1。 2.リンカーの追加:DNAフラグメントの両端に特定のリンカーシーケンスを追加します。 3。PCR増幅:リンカーシーケンスをテンプレートとして使用して、PCR増幅によって十分な数のDNAライブラリが取得されました。
3。特定の領域(エクソームシーケンス、ゲノム固有の領域シーケンスなど)のシーケンスプロジェクトのターゲットキャプチャこのステップは、シーケンスデータの精度と深さを改善することで、遺伝子または関心のある領域のよりターゲットを絞った分析に役立ちます。
iv。 2。シーケンス反応:シーケンサーは、合成、シーケンス、ライゲーション、シーケンスの方法を使用して、ライブラリの核酸断片を配列決定します。シーケンスプロセス中、シーケンサーは蛍光標識DNTP(デオキシリボヌクレオシド三リン酸)を徐々に導入し、蛍光信号を監視して各位置で塩基タイプを決定します。 3。画像キャプチャとデータ分析:高解像度カメラを使用して蛍光信号の画像をキャプチャし、バイオインフォマティクスソフトウェアを介して画像とシーケンスデータを処理および分析して、完全なシーケンス結果を取得します。
5つのデータ分析> 1。 2。二次分析:基本品質のスコアリング、シーケンスアライメント、バリエーション検出、その他のステップなど、ほとんどの場合、機器によって自動的に完了します。 3。第3レベルの分析:VCFファイルの処理を伴い、最終的なシーケンスの結果と生物学的意義を得るために、遺伝子注釈、バリアントフィルタリングなどのパーソナライズされた調整を行うことができます。
6データ分析の結果に基づいて、解釈と報告、単一ヌクレオチド多型(SNP)、挿入または欠失、構造的変動など、シーケンスデータの変動情報を解釈し、関連するデータベースと文献情報を組み合わせて、生物学的重要性の報告を提供します。
NGS実験プロセスは、DNA抽出、ライブラリ構築、ターゲットキャプチャ(オプション)、コンピューターシーケンス、データ分析などをカバーする複雑で詳細なプロセスです。各ステップは重要であり、結果の結果の精度と信頼性を確保するために、厳密な技術的運用と品質管理が必要です。
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