快速檢測微生物的方法規範

隨著製藥和生物科技產業不斷創新來滿足患者對療法的需求，新型療法的發展步伐也日益加快。業界見證了創新帶來的累累果實，例如細胞療法和基因療法，它們為無數的患者帶來了康復的希望。然而，許多此類療法都需要2-4天的周轉時間來確保治療的有效性。就減少此過程期間發生污染的風險而言，平板計數法等傳統微生物檢測方法力有不逮捕，因為其培養期至少需要5天才能獲得結果，檢測能力較低，且實際微生物水平易被低估。

新製程控制策略平板計數法的這些限制已迫使人們重新思考控制策略，以確保製程始終處於控制之下，從而減少發生污染的風險。快速微生物檢測方法(RMM)，包括製程所用之水，是此整體製程控制策略的關鍵。雖然平板計數法可以在培養期結束時確認水質，但利用RMM的測量結果而知曉過程處於控制之下卻使業界能夠最大限度地減小在所需週轉時間內放行產品的風險。然而，在完全採用此類RMM之前，業界一直在尋求監管機構給予他們的觀點和指導。另一方面，監管機構則意識到，創新療法的需求要求在原材料的製造、加工和監測方面進行創新。在批准這些創新療法後，監管機構希望確保患者的安全不會在療程中受到損害。他們也意識到目前經驗證微生物檢測方法的局限性，並已表示他們對將其他技術和方法視為整體過程控制策略的一部分持開放態度。儘管並非全世界的所有監管機構和藥典都已對這些關切作出回應，但各種監管機構和藥典之間的協調進程表明，隨著業界採取全球供應視角來看待問題，這種開放性將在全球範圍內得到體現。

美國藥典（USP）USP已意識到傳統平板計數法的限制。在第<1223>章中，它以各種表述專門地提及了這些局限性，如下所示：• 「有關從飲用水和環境水中回收微生物的研究已經表明，將細胞計數估計值報告為菌落形成單位(CFU)的傳統平板計數法可以回收樣本中0.1-1％的實際微生物細胞。細胞，結果也可能是0 CFU或無生長。其中包括：• 雷射誘導細胞螢光技術• 透過固相和流體螢光顯微鏡檢測重要染色細胞• 透過生物發光測量ATP水平這些方法都是RMM，它們可以透過立即檢測任何超標來更快地對任何微生物污染事件作出響應。儘管平板計數法是目前唯一經過驗證的用水放行方法，USP和FDA仍鼓勵使用者使用融合了其他技術的整體製程控制方法。 USP <1223>中還提供了統計方法，它們可以在為此類替代測量訊號設定基線和警報限值時使用。

歐洲藥品管理局（EMA）EMA已旗幟鮮明地表示鼓勵將RMM視為整體製程管制的一部分。 EMA在GMP附錄1“關於注射用水生產的常見問題解答”中強調了這一立場，並給出瞭如下聲明：• “應將替代/快速微生物檢測方法的使用作為系統整體控制策略的一部分。” • 「應將快速微生物檢測方法的使用視為控制策略的一部分，以便為針對系統劣化作出快速響應提供幫助。」透過如此明確的關於如何在整體製程控制中利用RMM的聲明，EMA鼓勵用戶不要單純依賴平板計數法。需要再次指出的是，雖然平板計數法仍是目前唯一經過驗證的用水放行方法，但其他方法的驗證也正在研究中，EMA將繼續鼓勵使用者將RMM納入整體製程控制中。

聯邦藥品管理局（FDA）如之前所述，監管者已意識到，傳統的平板計數法不夠迅速，因此某些已批准的療法需要重新思考製程控制策略。鑑於FDA調查人員通常處於執行工廠審查的第一線，業界熱切希望聽到FDA就RMM及其在過程中的使用亮明態度。 FDA的認可對充分證明業界實施RMM的正確性而言至關重要。

在（美國）貝塞斯達舉行的第14屆PDA全球藥用微生物學年度大會上的「專家答疑」環節期間，FDA代表被問到：「如果我仍在對用水系統進行傳統的平板計數，但我希望同時運行新的RMM做比對，那為什麼我需要對其進行驗證？微生物檢測方法以進行整體製程控制。 FDA澄清道，就鼓勵新技術以滿足業界的需求而言，這是PAT倡議的初衷。只要使用經過驗證的方法來放行用水，那麼當使用者探索能更好地控制其過程的方法時，它就可以在實質上為使用者提供「避風港」。這清楚地顯示了FDA對RMM的態度。 FDA承認RMM與其PAT倡議一致，該倡議旨在實現更好的過程控制並減少對過程採集樣本的依賴，而採集樣本只有在產品已經受到影響時才會揭示問題。為了進一步明確FDA的立場，一個獨立的過程和環境檢測方法(PEMM)協作工作小組與FDA的新興技術團隊進行了會談，共同探討RMM。 PEMM的成員包括許多主要製藥行業利益相關者以及與RMM相關的供應商。工作小組說明了雷射誘導螢光(LIF)技術的優勢，並要求FDA就將該技術用作製程控制工具給出立場聲明。 LIF是7000RMS™分析儀中的核心技術。

關於使用快速微生物檢測方法的監管意見總結

• USP和EMA鼓勵使用快速微生物檢測的替代性測試方法以進行製程控制
• USP更是強調了將雷射誘導細胞螢光技術（即7000RMS中的核心技術）用作細胞枚舉的替代方法之一
• FDA鼓勵在採用傳統的經驗證方法的同時，將互補的快速微生物檢測方法用作製程控制的一部分。
• 這些方法與PAT倡議的初衷一致

在回應中，FDA公開支持將該技術(LIF)作為與擔當第一步的傳統平板計數法並行使用的製程控制工具。這強調了他們在PDA大會上的回應，他們曾在大會上鼓勵將RMM用作對平板計數法等傳統經驗證方法的補充。此外，與採集樣本相比，RMM系統能夠以高於傳統方法的靈敏度連續監測水中的微生物總量。使用數據趨勢預測和分析功能的連續微生物監測能夠提供即時驗證，而即時驗證則可用於改善整體製程了解和製程控制。此外，隨著即時微生物技術越來越廣泛地用作製程控制工具，FDA表示願意討論各種方法，以證實該技術可以用作當前經驗證方法的潛在替代方案。 PEMM工作小組和其他業界組織將繼續與FDA合作定義這些驗證程序，從而使RMM可以用作經驗證的方法。然而，在此之前，FDA鼓勵將RMM用作與傳統平板計數法並行的製程控制工具。

越來越多的認可和鼓勵各種機構所做的聲明和回應清楚地表明，RMM可以在整體過程控制策略中發揮重要作用。監管機構鼓勵將它們與平板計數法等經驗證的方法並行使用，以便過程得到主動監測且用戶能夠對超標快速作出回應，從而防止污染事件。這種對RMM的認可對滿足不斷增長的創新療法需求而言至關重要，因此業界應適應其過程以滿足要求。

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符合全球法規要求監管機構鼓勵使用替代性的快速微生物學方法。