帶有OT-2光學中心的揮發性液體處理

作者MorayoAdeyibi, Ph.D.

介紹揮發性液體，即容易蒸發的液體在室溫下，是常見的各種試劑申請例如，乙醇、異丙醇、丙酮和甲醇，特別是各種核酸方法酸淨化[1]。隨著溫度的升高，波動率（或蒸發率）增加指數級的[2]。即使在室溫下，它們也是如此很難使用移液管，而最常見的問題是從尖端滴出來。液體的持續蒸發給移液中的揮發性液體帶來了挑戰。較高的蒸氣壓導致液體快速蒸發，液體更快噴射尖端。易失性在液體中，溫度的升高會增加波動性對液體中，以及隨後的蒸發速率還有蒸氣壓力。相反，稀釋液體降低了波動性和相應的特性。在這裡，我們提出了液體處理的最佳化通常是自動揮發性液體，包括各種稀釋度的乙醇和異丙醇。

關鍵的揮發性液體處理技術預潤濕技巧混合（）預潤濕是一種移液策略，可以反覆抽吸並分配一定體積的液體。揮發性液體的高蒸汽壓導致了噴嘴和液體之間的氣隙表面膨脹，迫使它們從尖端滴出來。預潤濕使噴嘴和液體表面之間的氣隙中的蒸發溶劑飽和，以幫助保持較低的蒸氣壓。

尾間隙抽吸（）我們可以讓空氣存在於尖端孔，以避免溢出。氣隙取決於蒸氣液體的壓力，被吸入的液體的體積，最重要的是由尖端從被吸入的甲板位置移動到分配位置所花費的時間。大多數揮發性液體的密度不如水（<997 kg/立方米）。當跟隨揮發性液體吸入空氣時吸入時，尖端內的液體向上加速，這可能導致過濾器或移液管管嘴堵塞。為了避免這種問題，尾部氣隙流量速度必須保持在很低的水平。具有較高蒸汽壓的液體，如丙酮、乙醚等。我們可以看到「酒的眼淚」效應[5]，即液體環通過後面的氣隙，在吸入的液體和液體之間創造了一個空空間嗎孔進一步滴從尖端。

提示退出速度移動到（）我們可以讓空氣存在於尖端孔，以避免溢出。氣隙取決於蒸氣液體的壓力，被吸入的液體的體積，最重要的是由尖端從被吸入的甲板位置移動到分配位置所花費的時間。大多數揮發性液體的密度不如水（<997 kg/立方米）。當跟隨揮發性液體吸入空氣時吸入時，尖端內的液體向上加速，這可能導致過濾器或移液管管嘴堵塞。為了避免這種問題，尾部氣隙流量速度必須保持在很低的水平。具有較高蒸汽壓的液體，如丙酮、乙醚等。我們可以看到「酒的眼淚」效應[5]，即液體環通過後面的氣隙，在吸入的液體和液體之間創造了一個空空間嗎孔進一步滴從尖端。

分配後延遲協定。延遲有兩個因素對準確地分配波動性至關重要液體首先，由於表面張力較低，液體粘在尖端表面的內部，並在剩餘的液體形成後慢慢向尖端孔移動分配第二，酒精環或眾所周知的酒淚會導致液體黏在液體表面上，滑向尖端孔，造成死體積。增加一個分配後的延遲可以減少死容量。

DoubleBlout（）可以再增加一次井噴來完成。為了進行第二次吹氣，將尖端從液體中抽出來吸入1µL的空氣進行第二次吹氣（液體內或流出）。吸入1µLair可以使柱塞保持其吸入狀態原始的位置與一個較小的位移。

揮發性液體的最佳化策略步驟1懸停到吸入的頂部，以較慢的速度浸泡尖端。

步驟2將尖端浸入液體內，並進行預潤濕。根據液體的揮發性來選擇預潤濕的步驟數。在Python API中混合（），允許你混合液體「n」次。

步驟3吸入（）在水校準流量下的揮發性液體。

步驟4對於大多數揮發性液體，尖端的回收速度必須降低到50 mm/s。這樣可以避免液體濺在實驗室上wallsmove_to（）的頂部50 mm/s。

步驟5依蒸氣壓，調整氣隙容積。 pipette.flow_rate。氣隙的吸入（）必須維持各自水流量的1/20倍吸液管。

步驟6以水校準的流量，分配尖端浸泡在液體下2.5mm的（）揮發性液體。這可以防止死容量的增加。

步驟7添加協議。延遲（）的時間為3 - 4秒這取決於液體的蒸氣壓。增加延遲可以使液體在進行井噴前在尖端沉澱。

步驟8執行移液管。在水校準的吹出流量下，吹出（）。

步驟9（可選）如果只是，在第一次吹出多餘的液體留在尖端內部後，使用mote_to(好。頂部（）)和抽吸（）1µLof的空氣，並浸泡在尖端（移動到（） ）在液體中，並進行第二次吹出。

步驟9如有必要，請在a處執行touch_tip（）位置取決於實驗室器皿內必要的高度。

步驟10取出尖端，移動到(好吧。頂部（）)，在較慢的流速為50 mm/s。

材料和方法三種稀釋度的乙醇，70%，80%和99% (SigmaAldrich，目錄編號752X，E-030,1.07017)作為具有代表性的揮發性液體進行了體積定量測試，並與水進行了比較。重量測量採用微量天平(Radwag，XA6/21.4Y.M.A.P加上微平衡器)。對4個中心GEN2 P20、P300和P1000移液管進行了體積測試。視中心P20非過濾器，P300非過濾器和P1000非過濾器尖端用於移液的揮發性液體。所有液體都在22˚到25˚的環境之間進行測試溫度和50% - 60%的相對濕度. 減少每個移液管的最大吸氣量，以比較氣隙效應。優化參數表1中列出的是用於重量設定上的體積測試。

所有參數都使用使用內部移液管驗證協定的中心Python API進行程式設計。這個尖端在液體外停留了大約15秒鐘。用4個不同的吸液管收集每體積吸液管10次重複。 Gen2 P20移液管的目標體積分別為1µL、10µL、15µLand 18µL。第2代P300代的目標體積為20µL、100µL和200µL。第2代P1000代的目標體積為100µL，500µLand 950µL。

結果與討論測量OT-2移液管的性能能力不準確地處理最常用的代表性揮發性液體，實驗相關研究了乙醇、異丙醇、丙酮和甲醇的稀釋度。乙醇和異丙醇具有相似的蒸氣壓範圍，因此我們採用了類似的移位參數。

預潤濕增加了吸液管內的體積，因為在預潤濕作用完成後，預潤濕附著在尖端表面的體積。預潤濕的好處可以看作是降低了揮發性液體的滴落量。沒有預先潤濕，較高濃度的乙醇，特別是99%的乙醇，更容易發生即使進行了尾隨的氣隙抽吸，也會迅速滴落。這就導致了對周圍環境的污染甲板和無法達到目標分配量。

雖然<10的吸入性用例有限µL揮發性液體，抽吸和分配可以目前的挑戰。對這些低體積的預潤濕可能導致過度吸入。然而，在使用P20時，所有測試體積的~均觀察到~1.5µL的死體積。死體積包括尖端中的蒸發液體，剩餘的液體為黏在尖端上。

反向移液，其中液體被預吸為滿體積，而沒有目標體積，對於高蒸汽壓的液體也會影響準確性。更高的氣隙體積可以幫助減少這種影響。由於由於氣隙體積的損失而需要分配的液體量尚不清楚，因此反向移液可能會導致額外的不準確性。

結論GEN2 P300和P1000的精度與水對移液管的性能相似。預潤濕步驟的影響會導致過度吸入在P20用於揮發性液體處理的情況下，建議對所需的目標進行預評估對於該協議的體積，並考慮到1到2µL死容量，請聯繫我們的支持根據您的協議提出適當的建議。所有最佳化參數都是針對所討論的環境因素，任何溫度或濕度的變化都可能影響所討論的參數。在處理蒸氣壓較高，根據環境溫度大於30 kPa的液體時，我們建議增加預潤濕混合物（>2倍），增加適當的氣隙體積和減少流量，以實現有效的液體轉移。死體積取決於蒸汽壓揮發性液體，移液管的體積(例如。P20，P300或P100)，尖端大小和分配時尖端浸泡深度。在分配期間浸泡尖端<2.5 mm會降低死體積。蒸氣壓較低、密度較高的液體的死體積較小。如果協議中不需要觸點或井噴，建議根據死體積考慮目標體積。結果表明，揮發性液體處理性能優化後的揮發性液體處理參數。使用者將能夠根據協議中使用的特定揮發性液體自訂參數。