使用 Opentrons 移液工作站進行自動化Elisa（酵素連結免疫吸附試驗）

簡介ELISA（酵素連結免疫吸附實驗）是一種廣泛應用於診斷和研究領域的重要測試方法。在這項技術中，確保樣本處理的一致性至關重要，而減少人工操作時間則可以有效降低人為誤差。我們利用Opentrons OT-2 和 Flex 液體處理工作站，開發並測試了多種自動化協定。透過這些自動化協議，您可以直接使用 ELISA 試劑盒進行實驗，也可以根據需要自訂特定的實驗流程。

方法

試劑盒: Takara Fibronectin (FN) EIA Kit（夾心法ELISA，圖1）

• 儀器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲）
2. 洗滌
3. 加酶標抗體
4. 洗滌
5. 加顯色底物

檢測方法: Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit（競爭法ELISA，圖2）

• 儀器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲）&標記抗原
2. 洗滌
3. 加顯色底物

• 检测方法: Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit
  （竞争法ELISA，图3）
• 儀器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲） & 標記ACE2
2. 洗滌
3. 加顯色底物

• 检测方法: SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads
  (磁珠式ELISA, 图4)
• 儀器: Opentrons OT-2 & 磁力架模組
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲）
2. 洗滌
3. 加酶標抗體
4. 洗滌
5. 加顯色底物

檢測：細胞激素檢測的測定方法開發（夾心法ELISA，圖5 ）儀器: Opentrons Flex工作流程:1 .ELISA 板準備2.洗滌3.加樣（靶向捕獲）4.洗滌5.加酶標抗體6.洗滌7.加底物顯色

結果

圖 6. Takara Fibronectin (FN) EIA Kit（圖 1 ）。對FN樣品進行梯度稀釋並檢驗，檢驗結果如圖所示:左圖為FN樣品濃度和平均吸光度（n=3）數據，呈現高度線性迴歸；右圖為3次重複實驗結果，呈現良好的重複性和穩定性。

圖 7. Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit （圖 2 ）。皮質醇樣本進行梯度稀釋並檢驗，檢驗結果如圖所示：左圖為皮質醇樣本濃度與平均吸光度（n=3）數據，呈現高度線性迴歸；右圖為3次重複實驗結果，呈現良好的重複性和穩定性。

圖 8. Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate（圖 3 ）。檢定結果表明，陽性的人血清樣本（先前已通過FDA 認證的ELISA 實驗檢測結果為陽性），在該測試中呈現結果為陽性（抑制率>20%，計算公式：抑制率= [1 - (樣本的OD450值/ 陰性對照的OD值)] x 100% ，n = 3）。

圖 9. SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads（圖 4 ）。對重組中和抗體樣本進行梯度稀釋並檢驗。檢定結果表明，陽性的人血清樣本（先前已通過 FDA 認證的 ELISA 實驗檢測結果為陽性），在該測試中呈現結果為陽性（n = 3）（右）。

圖 10. Assay Development for Cytokine Detection（圖 5 ）。在 96 孔板塗覆抗 TNF-alpha抗體和抗IFN-gamma抗體，對含有細胞激素的樣本進行ELISA檢測，數據如圖所示（n=6）。

結論

• 此工作站可用於執行從加抗體/抗原到加顯色底物的完整 ELISA 流程
• 结果表明样本处理的一致性高（变异系数<10%）、准确性高（R-squared>0.99），重复性
  好。
• 以 SARS-CoV-2 抗体检测为例，基于 96 孔板的商用试剂和基于磁珠的自制 ELISA 试剂均可
  实现全自动化处理，且结果与 FDA 认证的 Elisa 方法测定结果一致。