流式細胞儀樣品製備

什麼是流式細胞儀？

流式細胞儀是一種基於雷射的複雜技術，用於評估細胞表面和細胞內分子的表達。它是研究和診斷的核心，它能夠同時對單一細胞進參數分析，有助於表徵混合群體中的不同細胞類型，並可以測量是細胞大小和體積。流式細胞儀測定可確定分離的細胞亞群的純度，甚至對不同的細胞群進行分類，此過程稱為螢光活化細胞分選(FACS)。這是透過檢測用針對細胞蛋白或配體(如與 DNA 連接的碘化丙啶)的螢光抗體標記的細胞發出的螢光強度來實現的。

什麼是流式細胞儀？

根據其配置和預期應用，流式細胞儀可具有各種組件和功能，包括：

• 流體系統:  該系統以單列管道運輸細胞，確保每次只有一個細胞通過雷射束進行分析。
• 雷射:  用於在細胞穿過光束時照亮細胞。 根據細胞儀的配寘，可能會有多個不同波長的雷射器，以便同時檢測多個螢光標籤。
• 光學系統:  該系統檢測散射光和螢光。 它包括鏡頭和濾光片，以確保檢測到適當的光。
• 檢測器：將光訊號轉換為電子訊號，常見的檢測器包括用幹前向散射（FSC）的光電二極體和用幹側向散射（SSC）和螢光的光電倍增管（PMT）。
• 電子系統:  解釋從探測器接收到的訊號並將其轉換為可以視覺化和分析的數據點。

流式細胞儀樣品製備方法

流式細胞儀的樣本製備包括創建單細胞懸浮液(通常來自細胞培養物或組織樣本)，然後將這些細胞與未標記或螢光團標記的抗體一起孵育。以下是一些常見的 FC 樣品製備方法：

• 密度梯度離心:  該方法用於從血液等異質樣本中分離特定細胞群，例如淋巴細胞。
• 直接免疫螢光染色:  用螢光染料結合的抗體直接對細胞進行染色。
• 間接免疫螢光染色:  首先用未結合的一抗對細胞進行染色，然後用識別一抗的螢光素結合的二抗對細胞進行染色。

流式細胞儀樣品製備為何如此閒難：

• 細胞活力:  在製備過程中維持細胞健康和活力至關重要，但也很有挑戰性。
• 染色特異性:  確保螢光標記或抗體特異性結合，沒有非特異性染色或（背）景螢光。
• 樣本異質性:  處理混合多種細胞類型或狀態的樣本會使製備過程變得複雜。

與手動移液相比，流式細胞儀樣品製備自動化的優點如下：

• 一致性:  自動化確保均勻的樣品處理，減少差異性並提高可重複性。
• 效率:  自動化系統可以同時處理多個樣本，簡化準備流程。
• 減少樣品損失:  自動化設備可以更精確地處理樣品，從而最大限度地減少損失。
• 可靠性:  自動化減少人為錯誤並確保樣品製備的標準化方法。