BCA(二喹啉甲酸)法

需要進行 BCA 法的工作流程：

• 蛋白質純化過程，以確定產量和純度。
• 凝膠電泳前，確保蛋白負載量相等。
• 蛋白質標記或修飾前，確保使用了正確量的蛋白質。
• 細胞培養研究中，確定蛋白質表現量。

BCA 檢測的最佳方法

標準 BCA 法

最適合蛋白質濃度範圍在測定線性範圍內、樣本數量適中的常規應用。

1. 樣品製備： 首先收集和製備蛋白質樣本，確保樣本中不含幹擾物質。
2. 製備 BCA 工作試劑： 這通常包括將 BCA 溶液與硫酸銅（II）溶液以特定比例混合，通常由檢測試劑盒製造商提供。
3. 混合與孵育： 通常在比色皿或試管中將蛋白質樣本加入 BCA 工作試劑。通常在 37℃下孵育混合物 30 分鐘。
4. 測量： 孵育結束後，使用分光光度計在 562 nm波長處測量每個樣品的吸光度。
5. 分析： 將吸光度值與標準蛋白質（通常是牛血清白蛋白 (BSA)）的吸光度值進行比較，以確定樣本的蛋白質濃度。

微孔板 BCA 法

非常適合需要同時分析許多樣品的高通量篩選。它的試劑使用效率高，常用於大型研究或工業環境。

1. 樣品製備： 與標準檢測一樣，首先製備蛋白質樣品。
2. BCA 工作試劑： 製備相同的試劑，但要根據微孔板孔調整體積。
3. 分裝和孵育： 使用多通道移液管將蛋白質樣本和 BCA 工作試劑分裝到 96 孔板的孔中。通常在 37℃ 孵育 30 分鐘。
4. 測量： 使用微孔板閱讀器在 562 nm波長處測量吸光度。
5. 分析： 與標準方法一樣，使用標準曲線來確定蛋白質濃度。

針對含去垢劑樣品的改良 BCA 法

專門用於含有去垢劑的樣本，因為去垢劑會幹擾 BCA 反應。這種情況常見於從某些細胞類型或組織中提取蛋白質，或研究包埋在膜中的蛋白質。

1. 樣品製備： 萃取樣品中的蛋白質，注意去垢劑的濃度。
2. BCA 工作試劑： 依標準檢測方法配製。
3. 添加洗滌劑相容性試劑： 這些試劑通常在專門的 BCA 試劑盒中提供，添加這些試劑是為了消除去垢劑的干擾作用。
4. 混合與孵育： 與標準測定一樣，混合樣品和工作試劑並孵育。
5. 測量與分析： 使用分光光度計測量吸光度，並透過標準曲線確定蛋白質濃度。

如何實現 BCA 法的自動化：

• 液體處理工作站： 這些機器設計用於自動將液體移液到指定容器中，確保準確性和一致性。
• 整合系統： 有些平台整合了從樣品添加到讀取吸光度的整個過程，從而簡化了工作流程。
• 軟體： 自動化軟體可用於設定協議，確保每次檢測都以相同的方式進行。

與手動移液相比，自動化 BCA 法的優點：

• 一致性： 自動化可確保每次都以相同的方式執行每個步驟，從而減少變異性。
• 效率： 自動化系統可同時處理多個樣本，加速處理速度。
• 準確性： 自動移液減少了體積錯誤和交叉污染的風險。
• 資料完整性： 自動化系統通常配有整合的資料管理解決方案，可確保正確記錄和儲存結果。