C18色譜管柱的使用方法

C18色譜管柱全數十八烷基矽烷鍵結矽膠層析管柱，是一種反相層析管柱。其中「C18」指的是固定相的化學結構，即色譜柱填料為十八烷基矽烷鍵結相，這種色譜柱的固定相是經由化學鍵結的十八烷基官能基吸附在矽膠基質上的。 C18色譜柱的原理是基於化合物在C18填充物表面上的親疏水性差異，透過溶劑梯度洗脫來實現化合物的分離。具體來說，非極性載體表面具有疏水特性，能夠吸附非極性化合物，而偏極性的流動相中通常包含有機溶劑和緩衝液，其極性較高，在分離中發揮重要作用。

C18色譜管柱的使用方法

一、新管柱活化1、沖洗：新管柱使用前需以純有機試劑（如甲醇、乙腈）低流速沖洗，沖洗體積以20倍柱體積為宜，以便固定相能充分潤濕、碳鏈能舒展，使色譜管的性能達到最佳狀態。 2.防脫殼處理：將新柱浸入純甲醇或乙腈溶液中，旋轉或以其它方式使其表面完全接觸至少30分鐘。洗去大部分殘留有機物之後，用純水或75%甲醇或乙腈沖洗2~3次直到輸出液為無色無味。 3.酸鹼洗處理：在防脫殼處理完成後，使用0.11%的醋酸溶液滴於色譜柱表面並停留約30分鐘，並徹底用DI水沖洗乾淨。再以0.11%的氨水溶液吸附含氨基的樣品於管柱上並停留約30分鐘，之後再以DI水推出至輸出穩定。 4.梯度洗脫：加入摩爾比1:1的異丙醇和甲酸製成的混合液進管柱中，在流速為0.5 mL/min的條件下梯度洗脫（10% B，3min；40% B， 3min；95% B，3min，重置至10%過渡三分鐘），使其開放性自由膠體的更快恢復。

二、日常使用1、樣品處理：確保樣品經過適當處理，去除雜質及乾擾物質，以提高分離效果。 2.流動相選擇：依實驗要求選擇適當的流動相組成與比例。 3.流速控制：控制適當的流速，避免過高或過低的流速影響分離效果。 4.壓力監測：在使用過程中，注意監測色譜柱的壓力變化，及時發現並處理異常狀況。

三、維護1、沖洗層析管：每日實驗結束後，應沖洗層析管柱，尤其是流動相中含有酸或鹽時，需將層析管中的酸或鹽沖洗乾淨，通常建議以10%甲醇水沖洗20倍柱體積。 2.避免高水相條件：由於C18柱（極性改質處理的除外）的固定相疏水性較強，在使用過程中盡量不要使用高水相條件，若水相比例過高，易引起固定相疏水塌陷，導致柱效快速下降，甚至造成不可逆的負面影響。建議使用過程中水相比例不超過90%。 3.再生處理：當色譜管壓力升高、管柱性能下降時，通常為色譜管柱被污染，對色譜管進行再生處理可恢復部分管柱效。

四、長期保存1、沖洗：長期保存前要將層析管沖洗3~4小時以上。 2.保存溶劑：保存在純有機試劑或高比例的有機試劑溶液（如90%甲醇水）中。若第二天需繼續使用，日常保存溶劑也盡量與此相同。

五、注意事項1、避免劇烈震動：以免損壞色譜管。 2.防止乾燥：長期不使用時，應確保色譜管內充滿適當的溶劑，並封好兩端堵頭，以防止乾燥和污染。 3.使用壽命：C18色譜管柱的使用壽命約為100~200次，當輸出結果的峰形變得模糊、輸出穩定性下降時，請及時更換新柱。

六、常見問題與解決方案1、鹽析問題：使用C18色譜管柱時，可能會出現鹽析現象。這通常是由於流動相中的鹽類物質在色譜柱中析出所致。為了解決這個問題，可以採取優化流動相組成、使用耐高鹽的比例閥或加裝柱溫箱等措施。

2.色譜管阻塞：色譜管阻塞是另一個常見問題。這可能是由於流動相中的雜質、樣品中的不溶性物質或緩衝鹽類物質在色譜柱中沉積所致。為了解決這個問題，可以採取使用高水相進行沖洗、使用保護柱或柱前過濾器等措施來防止堵塞的發生。如果色譜管已經阻塞，可以嘗試使用反沖或超音波清洗等方法進行恢復。但請注意，柱芯和某些類型

相關閱讀推薦

自動化 PCR 電子書

OT-2 符合性聲明

9 個針對生命科學研究人員的 COVID-19 檢測資源

什麼情況下適合使用外置熱循環儀

OT-2 NGS工作站需要配置哪些設備

全自動移液工作站質譜前處理