Opentrons Flex PCR 工作站的pcr擴增流程

在生物科學的廣大領域中，聚合酶鏈反應（PCR）一直是分子生物學實驗的重要工具。這種技術能夠快速複製微量的DNA樣本，為後續的研究提供了堅實的基礎。結合了先進的機器人技術和精準的溫控系的Opentrons Flex PCR工作站，使得PCR擴增更加穩定可靠。無論是剛入門的學生或是經驗豐富的研究人員，這個平台都能幫助他們輕鬆實現高效且準確的PCR擴增。

Opentrons Flex PCR 工作站

一、實驗準備階段1、設計引子：根據目標DNA序列，利用專業的引子設計軟體設計出適合的引子對。引子設計需考慮特異性、長度、GC含量、退火溫度等因素。 2.準備模板DNA：萃取所需的DNA模板，測定其濃度和純度。確保模板DNA的濃度和純度符合PCR反應的要求。 3.配製PCR反應體系：依實驗需求，準備PCR反應混合液，包括DNA模板、引子、dNTPs（脫氧核苷三磷酸）、PCR緩衝液、MgCl₂（如需要）、Taq DNA聚合酶等。將所有成分以一定比例混合均勻，並分裝到PCR管中。

二、樣品裝載與儀器設定階段1、預熱Opentrons Flex PCR工作站：打開工作站，依實驗需求設定預熱溫度，通常為94-96℃。 2.裝填樣本：將配製好的PCR反應混合液加入PCR管中。將PCR管放置在Opentrons Flex PCR工作站的樣本架上。 3.設定PCR循環參數：在工作站的控制介面上，設定PCR擴增的循環參數，包括變性、退火和延伸的溫度和時間，以及循環次數。參數設定需根據具體的實驗需求和目標DNA序列的特性進行最佳化。

三、PCR擴增階段1、變性步驟：將反應器加熱至約93-98℃，維持一定時間（如20-30秒），使DNA雙股解離成單股。 2.退火步驟：將溫度降至約50-65℃，保持一定時間（如20-40秒），使引子與模板DNA單股的互補序列配對結合。 3.延伸步驟：將溫度升高至DNA聚合酶的最適溫度（通常為72℃），並維持一定時間（根據目標DNA片段的長度和DNA聚合酶的能力而定），使DNA聚合酶以dNTPs為原料，合成新的DNA鏈。 4.循環擴增：重複上述變性、退火和延伸步驟，形成PCR擴增的循環。通常一個PCR過程會使用25-35個循環，每循環一次，目標DNA片段的數量會加倍。

四、擴增結束與結果分析階段1、最終延伸：在所有循環結束後，通常會在72℃下進行額外的延伸步驟，以確保所有未完成的DNA鏈都被充分延伸。 2.降溫與取出樣本：擴增結束後，Opentrons Flex PCR工作站會自動降溫至4℃並保持，此時可取出樣本。 3.結果分析：以凝膠電泳、即時螢光定量PCR等方法分析PCR產物。觀察電泳圖譜中的DNA條帶，判斷PCR擴增是否成功以及擴增產物的特異性與濃度。

五、實驗後處理與儀器維護階段1、清理工作區：實驗結束後，及時清理工作區域，避免交叉污染。 2、數據記錄：記錄實驗結果，包括擴增曲線、電泳圖等，為後續實驗提供參考。 3.儀器維護：定期對Opentrons Flex PCR工作站進行維護與校準，確保儀器的準確性與穩定性。

Opentrons Flex PCR工作站的PCR擴增流程包括實驗準備、樣本裝載與儀器設定、PCR擴增、擴增結束與結果分析、實驗後處理與儀器維護等多個階段。每個階段都需要仔細操作，以確保PCR擴增的準確性和可靠性。

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