實時定量PCR

即時定量PCR，全稱為即時螢光定量PCR（Real-time Quantitative PCR，簡稱qPCR），是一種分子生物學實驗技術，它結合了PCR擴增技術和螢光檢測技術，能夠在PCR擴增過程中即時監測並定量特定DNA或RNA序列的拷貝數。

一、實時定量PCR的優缺點

優點：

1.高靈敏度和特異性：qPCR可以檢測極低濃度的核酸分子，並能準確地辨識目標序列。這使得它在臨床診斷中尤其重要，例如檢測病毒量。

2.定量能力強：透過螢光訊號的累積，可以即時監測反應的進行情況，從而達到絕對或相對定量。

3、快速且有效率：與傳統PCR相比，qPCR能夠在較短的時間內完成大量樣本的檢測，通常一小時內即可完成。

4.數據直觀：透過即時曲線圖，研究人員能夠直觀地觀察擴增曲線，以便於分析和結果解釋。

缺點：

1.成本較高：qPCR儀器和螢光染料的價格較昂貴，且運作成本也較高。

2.技術要求高：操作人員需具備一定的專業知識與技能，避免實驗誤差。

3.易受污染影響：由於其高靈敏度，樣品污染可能導致結果不準確，因此需要嚴格的實驗條件控制。

二、實時定量PCR的設備構成

實時定量PCR系統主要由以下幾個部分組成：

1.qPCR儀器：這是核心設備，配備螢光檢測系統，用於監控PCR反應過程中的螢光訊號變化。

2.熱循環儀：控制反應體系的溫度變化，實現DNA的變性、退火與延伸。

3.光學檢測系統：用於檢測反應管內的螢光訊號，並將其轉換為電訊號進行分析。

4.軟體：用於資料的採集、處理與分析，產生擴增曲線及標準曲線等結果。

三、實時定量PCR的操作方法

操作方法主要包括以下步驟：

1.樣本準備：萃取樣本中的DNA或RNA，並透過逆轉錄酶將RNA轉化為cDNA。

2.反應體系配製：包括引子、探針或染料、dNTP、Taq酶、緩衝液及模板核酸等成分的混合。

3.反應條件設定：根據特定的實驗需求，設定適當的PCR反應程序，包括預變性、循環變性、退火和延伸步驟。

4.數據收集和分析：在每個循環結束時，儀器會自動記錄螢光訊號，並透過軟體進行數據分析，計算出樣本的起始核酸量。

在科學研究和臨床診斷中，即時定量PCR的應用範圍廣泛。儘管它有一定的成本和技術門檻，但其無與倫比的精確性和高效性使其成為不可替代的工具。對科學研究人員和醫護人員來說，掌握這項技術的操作流程和設備使用方法，是提升實驗效率和數據準確性的關鍵。