OT-2海報上THP-1細胞過氧化氫水平的自動測定

測定OT-2上THP-1細胞中過氧化氫水平的自動化分析

瓦蘇達SNair博士.1金納裡·沃森博士11.Optrins實驗室公司。

介紹

沙桂油過氧化氫（H2O2)主要與細胞損傷有關；然而，重新生成百美分的研究表明，細胞釋放低水平的H2O2作為正常細胞間的一部分高頻率多路通信過氧化氫的轉運、攝取和釋放的機制生物學效應目前還不為人所知，但對癌症、幹細胞有重要意義細胞和老化。雙聯體紅色試劑是非螢光的基於10-乙醯3,7二羥基苯氧惡嗪的氧化，測定原理簡單它是由辣根過氧化物酶（HRP）催化的，在H2O2產生一個紅色螢光產物，間苯二酚，化學計量比為1：1。樹脂最終產物具有較高的消光係數這是一種超靈敏的檢測方法，只有10皮摩爾的H2O2在一個100 μL的捲中；1×10–5U/mL的HRP。這些讀數可以用分光光度法測量，也可以用螢光讀數法測量使用酶標儀，激發530 nm，發射波590 nm。

材料與方法

OT-2，P300單GEN2移液管，P20單GEN2移液管溫度模組設定為23°C，在協議結束時設定為37°C。 THP-1巨噬細胞樣細胞（ATCC，Manassas，VA，USA）(No。TIB-202)無酚紅RPMI 1640培養基（熱費雪科學11835030）佛波12-肉荳蔻酸13-醋酸酯（ PMA）（Sigma Aldrich P1585-1MG）胎牛血清（胎牛血清）未熱滅活（ATCC，Cat No. 30-2020）Amplex紅色檢測試劑盒(Cat No.A22188)，包括a) 5X反應緩衝液b) HRP c) DMSO d) Amplex紅色試劑e) 3% H2O2a)視中心96過濾器尖端架200μL b) 96過濾器尖端架20μL c)視中心10管架與獵鷹4 x 50 mL，6 x15mL錐形d)視中心24管架與埃彭多夫1.5 mL安全鎖扣帽（兩）

結論

OT-2可以進行測定H的自動化測定2O2在THP-1細胞OT-2可以以96孔的格式處理中等到高通量的樣本數量OT-2可以模擬人工協議而不損失時間和高度可重複性

討論

本研究是為了了解像Amplex Red這樣自動偵測H的可行性2O2在OT-2。 H2O2被證明是一種重要的訊號分子，負責代謝活性和幫助補酶激活，可以影響細胞形態，並在生長因子的存在下導致增殖。細胞外的H2O2這裡使用的細胞係是人類單核細胞，THP-1。結果表明，H可能依賴於濃度2O2不同PMA環境中的生產速率。 H的關係2O2釋放速率和PMA濃度可能是在10,25 ng/mL時比基礎速率顯著增加之後。 OT-2已成功用於NGS、IP中的各種實驗協議的自動化，從而簡化了標準試劑盒和分析協議的使用，可以手動勞動密集。透過自動化分析步驟，與手動方案相比，觀察到一致的檢測效能。此外，這也描述了量化過氧化物/過氧化物酶的人工和人工方案之間的移液效率。該協議能夠給用戶一個小時的實踐時間11分鐘，如果需要檢測多個不同細胞類型的96孔板，以檢測添加或不添加各種興奮劑或生長因子的過氧化氫水平，這可能是一種有效的方法。

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