会议邀请 | Opentrons 邀您一起探讨 AI 自动化检测技术,展望分子生物学实验前沿

查看详情

使用 Opentrons 移液工作站进行自动化Elisa(酶联免疫吸附试验)

简介
ELISA(酶联免疫吸附实验)是一种被广泛应用于诊断和研究领域的重要测试方法。在这项技术中,确保样本处理的一致性至关重要,而减少人工操作时间则可以有效降低人为误差。我们利用Opentrons OT-2 和 Flex 液体处理工作站,开发并测试了多种自动化协议。通过这些自动化协议,您可以直接使用 ELISA 试剂盒进行实验,也可以根据需要定制特定的实验流程。

方法

检测方法示意图

试剂盒: Takara Fibronectin (FN) EIA Kit
(夹心法ELISA,图1)

  • 仪器: Opentrons OT-2
  • 工作流程:
  1. 加样(靶向捕获)
  2. 洗涤
  3. 加酶标抗体
  4. 洗涤
  5. 加显色底物

检测方法: Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit
(竞争法ELISA,图2)

检测方法示意图
  • 仪器: Opentrons OT-2
  • 工作流程:
  1. 加样(靶向捕获)&标记抗原
  2. 洗涤
  3. 加显色底物

  • 检测方法: Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit
    (竞争法ELISA,图3)
  • 仪器: Opentrons OT-2
  • 工作流程:
  1. 加样(靶向捕获) & 标记ACE2
  2. 洗涤
  3. 加显色底物
检测方法示意图
  • 检测方法: SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads
    (磁珠式ELISA, 图4)
  • 仪器: Opentrons OT-2 & 磁力架模块
  • 工作流程:
  1. 加样(靶向捕获)
  2. 洗涤
  3. 加酶标抗体
  4. 洗涤
  5. 加显色底物
检测方法示意图
ELISA 板设计
图5

检测:细胞因子检测的测定方法开发(夹心法 ELISA,图 5 )
仪器: Opentrons Flex
工作流程:
1 .ELISA 板准备
2.洗涤
3.加样(靶向捕获)
4.洗涤
5.加酶标抗体
6.洗涤
7.加底物显色

结果

结果显示图

图 6. Takara Fibronectin (FN) EIA Kit(图 1 )。对FN样品进行梯度稀释并检验,检验结果如图所示:
左图为FN样品浓度和平均吸光度(n=3)数据,呈高度线性回归;右图为3次重复实验结果,呈现良好
的重复性和稳定性。

结果显示图

图 7. Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit (图 2 )。对皮质醇样品进行梯度稀释并检验,检验结果如图
所示:左图为皮质醇样品浓度和平均吸光度(n=3)数据,呈高度线性回归;右图为3次重复实验结
果,呈现良好的重复性和稳定性。

图 8. Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate(图 3 )。检验结果表明,阳性的人血清样本(
之前已通过 FDA 认证的 ELISA 实验检测结果为阳性),在该测试中呈现结果为阳性(抑制率 >
20%,计算公式:抑制率 = [1 - (样本的OD450值 / 阴性对照的OD值)] x 100% ,n = 3)。

图 9. SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads(图 4 )。对重组中和抗体样品进
行梯度稀释并检验。检验结果表明,阳性的人血清样本(之前已通过 FDA 认证的 ELISA 实验
检测结果为阳性),在该测试中呈现结果为阳性(n = 3)(右)。

图 10. Assay Development for Cytokine Detection(图 5 )。在 96 孔板涂覆抗 TNF-alpha
抗体和抗IFN-gamma抗体,对含有细胞因子的样品进行ELISA检测,数据如图所示
(n=6)。

结论

  • 该工作站可以用于执行从加抗体/抗原到加显色底物的完整 ELISA 流程
  • 结果表明样本处理的一致性高(变异系数<10%)、准确性高(R-squared>0.99),重复性
    好。
  • 以 SARS-CoV-2 抗体检测为例,基于 96 孔板的商用试剂和基于磁珠的自制 ELISA 试剂均可
    实现全自动化处理,且结果与 FDA 认证的 Elisa 方法测定结果一致。
联系我们

经验丰富的服务团队和强大的生产支持团队为客户提供无忧的订单服务。