생명 과학 연구 분야에서, Proteomics는 삶의 신비를 드러내는 핵심 도구로서 과학 연구자들로부터 널리 알려진 관심을 끌고 있습니다. Proteomics는 유기체의 모든 단백질의 구조와 기능을 종합적으로 분석하는 것을 목표로하며, 차등 단백질 스크리닝은 중요한 연구 내용 중 하나입니다. 그것은 우리가 다른 생리 학적 또는 병리학 적 조건에서 유의하게 변화하는 단백질을 식별하는 데 도움이되며, 따라서 생물학적 과정, 질병 발달 및 약물 반응에서 이들 단백질의 주요 역할을 밝혀냅니다.
1. 샘플 준비 1. 샘플 수집 : 연구 목적 및 샘플 소스 (예 : 조직 샘플, 혈청 또는 세포 배양 상청액 등)에 따라 다른 조건 또는 조직에서 단백질 샘플을 수집합니다. 2. 단백질 추출 : 샘플의 복잡성과 고품질 단백질을 추출하기위한 단백질 풍부의 범위를 고려하여 적절한 단백질 추출 방법을 선택합니다. 3. 정량화 및 전처리 : 추출 된 단백질 샘플을 정량화하여 실험에 동일한 양의 단백질이 사용되도록합니다. 이어서, 미분 단백질의 검출 민감도를 향상시키기 위해 저성도 단백질 제거, 특정 유형의 단백질을 풍부하게하는 것과 같은 전처리 단계가 수행된다.
2. 단백질 분리 1. 선택 분리 기술 : 겔 전기 영동 (예 : SDS-PAGE, 2 차원 겔 전기 영동 2-DE) 또는 액체 크로마토 그래피 (예 : HPLC, 이온 교환 크로마토 그래피, 역상 크로마토 그래피)와 같은 분리 기술을 사용하여 단백질을 다른 밴드 또는 피크로 분리합니다. 2. 완전 자동 피펫 팅 워크 스테이션의 작동 : (1) 피펫팅 프로그램 설정 : 실험 요구 사항에 따라 피펫 팅 볼륨, 피펫 팅 속도 및 피펫 팅 시간 수와 같은 매개 변수를 포함한 완전 자동 피펫 워크 스테이션에서 피펫팅 프로그램을 설정하십시오. (2) 자동 피펫 팅 및 분리 : 완전 자동 피펫 팅 워크 스테이션은 각 실험의 정확성과 일관성을 보장하기 위해 정해진 절차에 따라 피펫 팅 및 분리 작업을 자동으로 완료합니다.
3. 질량 분석법 분석 1. 질량 분석법 선택 : 질량 분석법 (예 : 탠덤 질량 분석법 MS/MS, LC-MS/MS와 결합 된 액체 크로마토 그래피 질량 분석법)을 사용하여 분리 된 단백질을 식별하고 정량화합니다. 2. 샘플 처리 및 주사 : 분리 된 단백질 샘플은 효소 용해, 유도체 화 등과 같은 적절하게 처리 된 다음 주사를 위해 질량 분석기에 로딩된다. 완전 자동 피펫 팅 워크 스테이션은이 단계를 자동으로 완료하여 샘플 처리의 정확성과 일관성을 보장 할 수 있습니다. 3. 질량 분석 데이터 획득 : 질량 분석기는 질량 분석 데이터를 수집하기 위해 주입 된 단백질 샘플을 스캔하고 분석합니다.
4. 데이터 분석 1. 질량 분석 데이터 분석 : 데이터베이스 검색, 라이브러리 매칭 및 정량적 소프트웨어의 도움을 받아 질량 분석 데이터를 분석하고 식별하여 확인 된 단백질을 결정합니다. 2. 차등 단백질 스크리닝 : (1) 데이터 전처리 : 데이터 분석의 정확도를 향상시키기 위해 대발, 정규화 등의 질량 분석 데이터를 전제로 처리합니다. (2) 통계 분석 : 통계적 방법 (예 : T- 검정, 분산 분석, 부분 최소 제곱 회귀 등)을 사용하여 다른 조건 사이의 단백질 발현 수준을 비교하고 차등 단백질을 식별합니다. 완전 자동 피펫 팅 워크 스테이션에서 제공하는 고정밀 및 일관성 데이터는 통계 분석의 정확도를 향상시키는 데 도움이됩니다. (3) 다중 가설 테스트 보정 : 차등 단백질 스크리닝을 수행 할 때, 거짓 양성 결과를 줄이기 위해서는 BH FDR 교정 방법과 같은 다중 가설 테스트 보정이 필요합니다. 3. 기능성 주석 및 농축 분석 : 생물학적 과정 및 관련 대사 경로에서 그들의 역할을 이해하기위한 차등 단백질의 기능적 주석. 동시에, 차등 단백질의 경로 농축 분석 및 차등 단백질 상호 작용 네트워크의 구성과 같은 생물 정보 학적 분석을 수행하여 생물학적 과정에서 이들 차등 단백질의 역할을 더욱 이해하기 위해 수행되었다.
5. 결과 검증 및 후속 연구 1. 차등 단백질의 검증 : 다른 실험 방법 (예 : 웨스턴 블롯, 면역 형광 등)을 통해 스크리닝 된 차등 단백질의 발현 수준 및 기능을 검증합니다. 2. 후속 연구 : 추적 연구는 질병의 발생 및 발달에서의 역할 탐색, 잠재적 인 약물 표적 찾기 등의 역할을 탐색하는 것과 같은 스크리닝 된 차등 단백질에 기초하여 수행됩니다.
완전 자동 피펫 팅 워크 스테이션의 도움으로, 차등 단백질 스크리닝 실험은 더 빠르고 정확하며 신뢰성이 높아졌습니다. 연구자들은 다른 생리 학적 또는 병리학 적 조건 하에서 크게 변화하는 단백질을 신속하게 식별 한 다음 생물학적 과정, 질병 발생 및 약물 반응에서 이들 단백질의 주요 역할을 심층적으로 탐색 할 수 있습니다. 이것은 질병의 진단 및 치료를위한 새로운 아이디어와 방법을 제공 할뿐만 아니라 새로운 약물 연구 개발 및 바이오 마커 발견 분야를위한 새로운 방법을 열어줍니다.
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