분자 생물학 연구 분야에서 RNA는 유전자 정보의 송신기로서 중요한 역할을한다. 그러나 복잡한 생물학적 조직에서 RNA를 효율적이고 정확하게 추출하는 것은 쉽지 않습니다. 그 중에서, 조직 단편화는 RNA 추출 과정의 핵심 단계이며, 원리와 방법은 RNA의 추출 효율 및 순도와 직접 관련이있다.
1. 주요 원리 RNA 추출 과정에서 조직 단편화는 주요 단계 중 하나입니다. 원리는 특정 시약 (예 : 구아니딘 이소 티오 시아 네이트, 페놀 등)에 성분을 사용하여 세포를 신속하게 해소하는 것입니다. 이들 성분은 강력한 단백질 변성 효과를 갖는데, 이는 단백질을 용해시키고 단백질의 2 차 구조가 사라져서 핵 단백질 소마의 해리를 촉진 할 수있다. 이 과정은 원래 단백질에 밀접하게 결합 된 RNA가 방출되고 용액 상태로 들어가도록 허용한다.
2. 특정 구성 요소 및 기능 1. 그것은 주로 단백질을 용해시키고 단백질의 2 차 구조가 사라짐에 의해 세포의 목적을 달성한다. 페놀 : 페놀은 단백질을 효과적으로 변성 할 수 있으며, 클로로포름과 함께 사용될 때 내인성 및 외인성 RNase의 억제를 향상시킬 수있다. 이는 RNA를 분해로부터 보호하고 추출 된 RNA가 고순도를 갖도록하는 데 도움이됩니다.
3. RNA 추출 과정에서 3. 보조 단계 및 성분 조직 단편화에 단백질 변성제를 사용하는 것 외에도 일련의 보조 단계와 성분도 RNA를 추가로 정제하고 추출해야합니다. 예를 들면 : 1. 클로로포름 추출 : 유기 용매로서 클로로포름은 세포를 빠르게 파괴하고 균질 물의 지방 수용성 불순물을 제거 할 수 있습니다. 동시에, 그것은 또한 RNA 효소의 활성을 억제하고 단백질을 변성시켜 원심 분리에 의해 쉽게 제거 할 수있게한다. 이 단계는 RNA가 DNA 및 단백질과 같은 불순물과 분리하는 데 도움이됩니다. 2. 이소 프로판올 침전 : 이소프로판올은 RNA의 국소 밀도를 증가시키고 용액에서 침전시킨다. 침전 된 RNA는 원심 분리에 의해 수집되어 비교적 순수한 RNA 생성물을 얻을 수있다.
4. prescautions RNA 추출 조직이 파손되면 다음과 같은 점에주의를 기울여야합니다. 1. 수술 중에는 외인성 RNA 효소의 오염을 제거하고 내인성 RNA 효소 활성을 억제하는 것을 포함하여 RNA 효소없이 환경을 조성하십시오. 이것은 RNA 분해의 위험을 줄이는 데 도움이됩니다. 2. 실온에 장기 노출을 피하기 위해 샘플 처리는 신속하고 빠르야하여 RNA 분해를 유발합니다. 3. 사용 된 시약 및 혈관은 멸균되어야하며 RNA 효소 오염이 없어야한다.
RNA 추출 및 조직 단편화의 원리는 주로 세포를 신속하게 절단하고 RNA를 방출하기 위해 고농도의 단백질 탈성제 (예 : 트리 재 시약에서 구아니딘 이소 티오 시아 네이트 및 페놀)에 의존한다. 고순도 RNA 생성물은 일련의 보조 단계 및 성분의 처리에 의해 추가로 정제되고 추출 될 수있다.
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