염색질 면역 침전 시퀀싱 (ChIP-Seq)은 유전자 발현 조절, DNA 변형 및 단백질 -DNA 상호 작용을 연구하는 데 중요한 기술이다. 이 기술을 통해 연구자들은 염색질에서 단백질 -DNA 결합 부위를 효율적으로 분석하여 유전자 발현의 조절 메커니즘을 더 밝힐 수 있습니다.
1. 세포 처리 및 가교 1. 세포가 적절한 밀도에 대한 표적 세포와 세포가 활성 성장 상태에 있는지 확인한다. 2. 포름 알데히드 가교 : 포름 알데히드와 같은 가교제를 사용하여 세포를 처리하여 세포에서 단백질과 DNA 사이의 안정한 가교를 형성한다. 포름 알데히드 농도 및 처리 시간은 실험 요구에 따라 최적화되어야합니다.
2. 세포 용해 및 염색질 단편화 1. 2. 염색질 단편화 : 크로 마틴 단편화는 일반적으로 길이가 100 ~ 500bp의 초음파 처리 또는 효소 분해에 의해 적절한 크기의 DNA 단편으로 단편화된다. 이 단계는 후속 면역 침전 및 시퀀싱을 용이하게한다.
3. 면역 침전 1. 2. 면역 복합 침전 : 항체-단백질 -DNA 복합체를 침전시키기 위해 단백질 A/G 자기 비드 또는 기타 방법을 사용하십시오. 자성 비드를 세척함으로써 부적절하게 결합 된 DNA 및 단백질을 제거 하였다.
IV. DNA 정제 1. 고온과 프로테아제 K를 사용하여 면역 침전 복합체를 치료하여 단백질과 DNA 사이의 가교를 차단하고 정제 된 DNA 단편을 방출합니다. 2. DNA 추출 : 정제 된 DNA 단편은 후속 시퀀싱 라이브러리 구조를 위해 원심 분리, 여과 등에 의해 추출되었다.
5 서열 라이브러리 구조 1. 2. 시퀀싱 링커 추가 : DNA 단편 끝에 시퀀싱 링커를 추가하여 후속 시퀀싱 반응에 사용됩니다. 3. 라이브러리 증폭 : 시퀀싱 라이브러리는 PCR 및 기타 방법에 의해 증폭되어 시퀀싱을위한 충분한 수의 DNA 단편을 얻습니다.
6. 높은 처리량 시퀀싱 1. 2. 시퀀싱 반응 : 고 처리량 시퀀싱을 위해 시퀀싱 라이브러리를 시퀀서에 추가합니다. 시퀀싱은 후속 생물 정보학 분석을 위해 다량의 DNA 서열 데이터를 생성 할 것이다.
7. 데이터 분석 1. 2. 정렬 및 주석 : 전처리 된 서열을 참조 게놈에 알리면 단백질이 DNA와 상호 작용하는 부위를 결정한다. 동시에, 유전자 주석 및 기능 분석을 이들 유전자좌에서 수행 하였다. 3. 피크 검출 및 분석 : 전문 소프트웨어 도구를 사용하여 게놈의 단백질 결합 부위를 나타내는 Chip-Seq 신호 피크를 감지합니다. 이들 피크와 유전자 발현, 후성 유전 적 마커 등 사이의 관계를 추가로 분석 하였다. 4. 차이 분석 : 다중 샘플 실험의 경우, 차등 분석을 수행하여 단백질의 차등 부위 및 상이한 샘플 사이의 DNA 상호 작용을 식별 할 수 있습니다.
염색질 면역 침전 시퀀싱 (ChIP-Seq)은 여러 중요한 단계 및 미세 작업을 포함하는 복잡하고 미세한 실험 기술입니다. 각 단계는 결과의 정확성과 신뢰성을 보장하기 위해 실험 조건과 품질을 엄격하게 제어해야합니다.
관련 읽기 권장 사항
왜 우리는 왜 세계에서 가장 저렴한 완전 자동 열 사이클러를 만드는가
Opentrons Flex 시약 분취 작업장 팁을 재사용 할 수 있습니까?
숙련 된 서비스 팀과 강력한 생산 지원 팀은 고객에게 걱정이없는 주문 서비스를 제공합니다.
简体中文
繁體中文
英语
