단백질 샘플 제조는 단백질 연구를 수행 할 때 실험에서 중요한 단계입니다. 실험 결과의 정확성과 신뢰성에 직접적인 영향을 미치므로 단백질 샘플 준비의 원리를 이해하는 것이 특히 중요합니다. 단백질 샘플 제조에는 정확한 작업이 필요할뿐만 아니라 추출, 정제, 저장 등 중 샘플이 오염되고 저하되지 않도록 연구 목표를 기반으로 적절한 치료 방법을 선택해야합니다.
1. 일관성과 열화 방지 1. 일관성 유지 : 전체 실험 중에는 인공 오류를 도입하지 않도록 샘플 처리의 일관성을 최대한 유지해야합니다. 대조군 및 실험 그룹을 포함하여 동일한 방법 및 조건을 사용하여 상이한 샘플을 처리 하였다. 2. 분해 방지 : 단백질 샘플은 수집 후 즉시 처리하거나 냉장 보관해야합니다. 샘플을 동결 할 때 액체 질소 또는 -80 ° C 냉동고를 사용하여 단백질 분해를 방지해야합니다. 샘플을 준비 할 때 샘플을 저온에서 유지하여 단백질 분해 속도를 늦추십시오. 냉각 장치는 아이스 박스에서 작동하거나 사용할 수 있습니다. 연장 된 원심 분리, 고온에 대한 노출, pH 변화 또는 효소 활성의 존재를 피하기 위해 원심 분리, PH 변화 또는 효소 활성의 존재를 피하십시오.
2. 용해도 및 불순물 제거 1. 일반적으로, TRIS-HCL, PBS 또는 HEPE와 같은 완충제는 분석 할 모든 단백질 샘플이 용해 된 상태이며 안정적이고 반복 가능하도록하는 데 사용됩니다. 2. 불순물 제거 : 핵산, 조직 단편 또는 특정 고해상도 무관 한 단백질을 포함하여 하류 응용을 방해하는 불순물을 제거하십시오. 이러한 불순물은 단백질 농도 측정, 전기 영동 이동성 및 다른 분자와의 상호 작용에 영향을 줄 수 있습니다.
3. 다운 스트림 실험에 따라 추출 방법을 선택하십시오. 1. 추출 방법 선택 : 다운 스트림 실험의 특정 요구 사항에 따라 적절한 단백질 추출 방법을 선택하십시오. 예를 들어, 단백질의 인산화 상태가 필요하다면, 단백질의 인산화를 유지할 수있는 추출 방법을 사용해야한다. 2. 추출 된 단백질의 유형 : 실험 요건에 따라, 변성 단백질 또는 활성 단백질을 추출 할 것인지, 그리고 총 단백질 또는 세포 내 구조 성분 단백질을 추출 할 것인지 결정된다. 세포 내 구조 분리는 저급 단백질의 하중 부피를 증가시키고, 검출 난이도를 줄이며, 특정 세포 성분의 단백질을 분석 할 수 있습니다.
4. 샘플 처리 및 기록 1. 샘플 처리 : 준비 과정에서 샘플의 오염을 피하기 위해 깨끗한 워크 벤치, 실험 장비 및 장갑을 사용하는 데주의를 기울여야합니다. 모든 도구, 시약 병 개구부 및 튜브는 깨끗하게 유지해야합니다. 2. 세부 기록 : 전체 샘플 준비 프로세스 중에 샘플 소스, 처리 단계, 농도 등을 포함한 자세한 정보를 기록하여 후속 실험에서 추적 및 분석 할 수 있어야합니다.
단백질 정량화 및 변성 1. 단백질 정량화 : 올바른 샘플 양이 후속 실험에서 사용되도록 단백질 샘플의 농도를 결정하는 것이 매우 중요하다. 단백질 농도는 Bradford, BCA 또는 Lowry와 같은 방법을 사용하여 결정할 수 있습니다. 2. 단백질 변성 : 실험 요구에 따라 단백질의 변성이 필요할 수있다. 일반적으로 사용되는 변성 제는 SDS 등을 포함하며, 단백질은 가열에 의해 변성 될 수있다.
단백질 샘플 준비는 샘플의 품질과 일관성을 보장하기 위해 일련의 원칙을 필요로하여 신뢰할 수있는 실험 결과를 얻습니다. 이러한 원리는 샘플 수집에서 처리, 용해, 불순물 제거, 추출 방법 선택, 샘플 처리 및 기록, 단백질 정량화 및 변성에 이르기까지 모든 측면을 다룹니다.
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