단백질 샘플 준비는 생물학, 화학 및 의료 연구에서 중요한 연결 고리이며, 후속 분석 및 실험의 기초를 제공합니다. 단백질 연구, 효소 활성 분석 또는 항체 스크리닝이든, 단백질 샘플의 제조는 중요한 역할을한다.
1. 샘플 선택 및 처리 1. 샘플 선택 : 실험 목적에 따라 적절한 조직 또는 세포를 샘플로 선택하십시오. 조직 샘플의 경우, 신선한 처리를 보장하고 결합 조직 및 지방 조직을 제거해야합니다. 세포 샘플의 경우, 상이한 원심 분리 및 수집 방법이 현탁 또는 부착 된 세포인지에 따라 사용될 수있다. 2. 샘플 단편화 : 세포에서 단백질을 방출하기 위해서는 샘플을 분해해야합니다. 일반적으로 사용되는 방법은 분쇄, 균질화, 초음파, 효소 용해 등을 포함합니다. 분쇄 과정에서 온도를 낮게 유지하여 단백질 분해를 줄입니다.
2. 단백질 추출 1. 용 해물 선택 : 샘플 유형 및 후속 실험 요구에 따라 적절한 용 해물을 선택하십시오. 일반적으로 사용되는 용 해물에는 RIPA, NP-40, SDS 등이 포함됩니다. 세포막 또는 세포벽 및 방출 단백질을 파괴 할 수 있습니다. 2. 용해 작동 : 얼음 위의 샘플에 용 해물을 첨가하고 충분한 균질화 또는 분쇄를 수행하여 단백질의 완전한 방출을 보장합니다. 용해 후, 불용성 물질은 원심 분리에 의해 제거되어 단백질 상청액을 얻는다.
3. 단백질 농도의 결정 1. 결정 방법 : BCA 방법, Bradford 방법 또는 Lowry 방법을 사용하여 단백질 농도를 결정합니다. 이들 방법은 단백질이 특정 시약과 반응하여 색상 변화를 생성한다는 원리에 기초한다. 2. 농도 조정 : 측정 결과에 따라 단백질 농도를 조정하여 실험 조건을 균일하게 만듭니다. 이것은 일반적으로 단백질 샘플을 적절한 농도 범위로 희석하거나 농축하는 것을 포함합니다.
4. 단백질 변성 (필요한 경우) 1. 변성 목적 : 일부 실험에서는 단백질을 변화시키고 분리하고 탐지하기가 더 쉬워 지도록 단백질을 변성해야합니다. 일반적으로 사용되는 변성 제는 SD, 요소 등을 포함합니다. 2. 변성 작용 : 단백질 샘플에 변성제를 첨가하고 단백질 (예 : 95 ℃에서 5 분 동안 가열)을 가열하여 단백질을 변성시킨다. 변성 단백질 샘플은 후속 전기 영동 또는 면역 블 롯팅 실험에 직접 사용될 수있다.
5. 샘플 저장 및 기록 1. 샘플 저장 : 분해 및 오염을 방지하기 위해 제조 된 단백질 샘플을 분취하여 적절한 조건 (-80 ° C 냉장고)하에 저장합니다. 2. 기록 정보 : 소스, 처리 단계, 농도 측정 결과 및 샘플의 기타 정보를 자세히 기록하여 후속 실험을 분석하고 추적합니다. 전체 단백질 샘플 준비 과정에서 오염을 피하기 위해 멸균 수술 사양을 엄격하게 따라야한다는 점에 유의해야합니다. 동시에, 최상의 실험 결과를 얻기 위해 실험적 필요에 따라 적절한 용 해물 및 항체를 선택해야합니다. 또한, 특정 실험 요구에 따라 준비 과정을 조정하고 최적화 할 수 있습니다.
단백질 샘플 제조의 기본 프로세스에는 샘플 선택 및 가공, 단백질 추출, 단백질 농도 측정, 단백질 변성 (필요한 경우) 및 샘플 저장 및 기록이 포함됩니다. 이 단계는 함께 단백질 샘플의 품질과 신뢰성을 보장하여 후속 실험 분석을위한 견고한 기초를 제공합니다.
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