단백질 샘플 제조는 현대 생물학적 및 생화학 적 실험, 특히 단백질 분석, 구조 연구 및 기능적 연구에서 중요한 단계입니다. 질량 분석법, 면역 침전 또는 단백질 결정학이든, 단백질 샘플의 순도 및 품질은 실험 결과의 정확도에 직접적인 영향을 미칩니다. 연구의 원활한 진행을 보장하기 위해 단백질 샘플의 제조 방법은 미세하고 효과적이어야합니다. Opentrons 편집자는 몇 가지 일반적인 단백질 샘플 준비 방법을 소개하고 실용적인 팁을 제공합니다.
1. 단백질 추출 방법 단백질 추출은 샘플 준비의 첫 단계이다. 종종, 우리는 세포 나 조직에서 단백질을 추출해야합니다. 이 단계에서, 적절한 완충제를 선택하는 것이 중요하며, 일반적인 단백질 추출 완충제는 고농도의 염을 함유하는 완충제, 세제를 함유하는 완충제 및 프로테아제 억제제를 함유하는 완충제를 포함한다. 선택해야 할 특정 추출 방법은 표적 단백질의 성질, 공급원 및 실험 요구에 따라 결정해야합니다. 1. 세포 용해 방법 : 단백질을 추출하기위한 물리적 방법 (예 : 초음파 파괴, 고압 균질화) 또는 화학적 방법 (예 : 세포막의 계면 활성제 파열과 같은)에 의한 세포 함량을 방출합니다. 이 방법은 대부분의 세포 유형, 특히 동물 세포에 적합합니다. 2. 조직 파괴 방법 : 고체 조직의 경우, 액체 질소 연삭 방법 또는 유리 비드 연삭 방법이 사용될 수있다. 액체 질소 분쇄는 세포 구조를 효과적으로 파괴하고 세포에서 단백질을 방출 할 수있는 반면, 유리 비드 그라인딩은 섬유 조직의 절단에 적합합니다.
2. 단백질 정제 단백질 추출 후, 정제는 일반적으로 지질, 핵산 및 소분자와 같은 다른 불순물을 제거하기 위해 필요하다. 일반적인 단백질 정제 방법은 다음을 포함한다 : 1. 원심 분리 방법 : 고속 원심 분리에 의한 별도의 세포 잔해, 핵산 및 기타 불용성 물질은 표적 단백질을 함유하는 상청액을 수득한다. 2、亲和层析：通过使用特定的配体或抗体与目标蛋白结合，利用这种特异性亲和力进行纯化。比如，使用GST标签或His标签的融合蛋白，通过GST亲和柱或镍离子亲和柱进行纯化。 3、凝胶过滤层析：通过根据蛋白质的分子大小进行分离。小分子被慢速洗脱，而大分子较快被洗脱出来。 4、离子交换层析：依据蛋白质的电荷特性，将带有不同电荷的蛋白质分离开。 이온 교환기와 표적 단백질 사이의 상호 작용은 완충액의 pH 또는 염 농도를 변화시킴으로써 조정되어 분리를 달성한다.
三、蛋白质浓缩在大多数实验中，得到的蛋白质样品需要进一步浓缩。 일반적으로 사용되는 농도 방법은 다음을 포함한다 : 1. 투석 방법 : 단백질을 농축하는 목적을 달성하기 위해 반투과성 막을 통해 완충액으로 단백질 용액에서 소분자 물질을 교환한다.透析法适用于需要去除小分子杂质的情况。 2. Ultrafiltration 방법 : 단백질을 농축시키기위한 원심 분리 또는 압력에 의해 용액에서 수분 및 소분자를 분리하기 위해 Ultrafiltration Membrane을 사용하십시오. 3. 에탄올 침전 방법 : 에탄올 또는 다른 유기 용매를 첨가하여 단백질을 침전시켜 용액에서 불순물을 제거한다.这种方法简单且经济，但需要注意溶剂对蛋白质的稳定性影响。
4. 단백질 보존. 단백질 샘플 보존도 중요한 단계입니다. 단백질 샘플이 제대로 처리되지 않으면 분해 또는 불 활성화로 이어질 수 있습니다. 일반적인 단백질 보존 방법은 다음과 같습니다. 1. 동결 보존 : 분취제 정제 된 단백질 용액 및 동결 예방, 일반적으로 단백질 분해를 방지하기 위해 -80 ° C 아래에 저장됩니다. 2. 보호 제를 추가 : 글리세린, 디티오 그리 톨 (DTT) 및 기타 보호 제를 단백질 용액에 첨가하면 단백질이 냉동 상태의 산화 또는 구조적 변화로부터 보호 할 수 있습니다. 3. 동결 건조 방법 : 진공 펌핑 물을 통해 단백질 용액을 얼리고 수분을 제거하여 샘플을 건조 상태로 변환하여 장기 저장에 적합합니다.
5. 단백질 샘플을 준비하는 과정에서 예방 조치 및 최적화 샘플의 안정성, 순도 및 활동을 보장하는 것이 성공의 열쇠입니다. 다음은 몇 가지 최적화 기술입니다. 1. 샘플을 적시에 처리하십시오. 단백질은 추출 및 정제 중에 분해하기 쉽기 때문에 작동 시간을 최소화하고 프로테아제 억제제를 제 시간에 추가하고 저온을 유지해야합니다. 2. 반복적 인 동결 시동을 피하십시오. 동결 시동은 단백질 샘플을 분취하고 저장하는 것이 좋습니다. 3. 올바른 완충액 선택 : 다른 단백질은 pH, 염 농도 또는 세제와 같은 성분에 민감 할 수 있으므로 샘플을 준비 할 때 표적 단백질의 특성에 따라 적절한 완충액을 선택해야합니다.
단백질 샘플 제조는 세포 파괴, 단백질 추출, 정제, 농도 및 보존의 여러 링크를 다루는 기술적으로 까다 롭고 복잡한 과정입니다. 적절한 준비 방법을 마스터하는 것은 실험 데이터의 신뢰성과 정확성을 보장하는 데 중요합니다.
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