C18 크로마토 그래피 컬럼의 전체 이름은 역상 크로마토 그래피 컬럼 인 옥타 데 체실산 결합 실리카 겔 크로마토 그래피 컬럼이다. 그 중에서 "C18"은 정지상의 화학적 구조를 지칭합니다. 즉, 크로마토 그래피 컬럼 필러는 옥타데 실란 결합 상이며,이 크로마토 그래피 컬럼의 고정상은 화학적으로 결합 된 옥타 데실 기능기를 통해 실리카 겔 매트릭스에 흡착된다. C18 크로마토 그래피 컬럼의 원리는 C18 충전제 표면에서 화합물의 친수성 차이에 기초하여 용매 구배 용리에 의한 화합물의 분리를 달성하는 것이다. 구체적으로, 비극성 담체의 표면은 소수성 특성을 가지며, 분극화 된 이동상은 일반적으로 유기 용매 및 완충제를 함유하며, 이는 극성이 높고 분리에 중요한 역할을한다.
1. 새로운 컬럼 활성화 1. 린스 : 사용하기 전에, 새로운 컬럼은 헹굼 부피가 20 배나 낮은 유기체의 순수한 유기 시약 (예 : 메탄올 및 아세토 니트릴)으로 헹구어야하므로 고정기는 최상의 상태에 도달 할 수 있도록합니다. 2. 방지 방지 처리 : 순수한 메탄올 또는 아세토 니트릴 용액에 새로운 컬럼을 침지시키고, 표면을 30 분 이상 완전히 접촉 할 수 있도록합니다. 대부분의 잔류 유기물을 씻은 후, 출력 액체가 무색이없고 무취가 될 때까지 순수한 물 또는 75% 메탄올 또는 아세토 니트릴로 2 ~ 3 배로 헹구십시오. 3. 산-염기 세척 처리 : 방지 방지 처리가 완료된 후, 0.11% 아세트산 용액을 사용하여 크로마토 그래피 컬럼의 표면에 떨어 뜨리고 약 30 분 동안 머무르고 DI 물로 철저히 헹구십시오. 이어서, 아미노 함유 샘플을 0.11% 수성 암모니아 용액으로 컬럼에 흡착하고 약 30 분 동안 유지 한 다음 DI 물로 밀어 출력을 안정화시켰다. 4. 그라디언트 용리 : 1 : 1의 몰비로 이소프로판올과 포름산의 혼합물을 컬럼에 첨가하고, 구배 용출은 0.5 mL/분 (10% B, 3 분, 40% B, 3 분, 3 분, 3 분 동안 10%)의 유속입니다.
2. 매일 사용 1. 샘플 처리 : 분리 효과를 향상시키기 위해 불순물과 간섭 물질을 제거하기 위해 샘플을 올바르게 처리해야합니다. 2. 이동 상 선택 : 실험 요구 사항에 따라 적절한 이동 상 구성 및 비율을 선택하십시오. 3. 유량 제어 : 분리 효과에 영향을 미치는 과도하게 높거나 낮은 유속을 피하기 위해 적절한 유속을 제어하십시오. 4. 압력 모니터링 : 사용 중에 크로마토 그래피 컬럼의 압력 변화를 모니터링하는 데주의를 기울이고 비정상적인 상황을 즉시 감지하고 처리합니다.
3. 유지 보수 1. 컬럼을 헹구기 : 매일 실험 후에는 컬럼에 산 또는 소금이 포함되어있을 때 컬럼의 산 또는 소금을 헹구는 것이 좋습니다. 2. 고수 위상 조건을 피하십시오 : C18 컬럼의 고정 상 (극성 변형 처리 제외)은 소수성이 매우 높기 때문에 사용 중에 고수상 조건을 사용하지 않으려면 고정상의 비율이 너무 높아서 컬럼의 빠른 감소를 유발할 수 있습니다. 사용 중에 수성 상 비율은 90%를 초과하지 않아야합니다. 3. 재생 처리 : 컬럼 압력이 상승하고 컬럼 성능이 감소하면 컬럼의 재생 처리는 일부 열 효과를 회복시킬 수 있습니다.
4. 장기 저장 1. 린스 : 긴 저장 전 3 ~ 4 시간 이상 크로마토 그래피 컬럼을 헹굽니다. 2. 용매 저장 : 순수한 유기 시약 또는 높은 비율의 유기 시약 용액 (예 : 90% 메탄올 물)에 보관하십시오. 다음날 계속 사용해야하는 경우 솔벤트를 매일 저장에 유지하십시오.
5. 예방 조치 1. 폭력 진동을 피하십시오 : 크로마토 그래피 컬럼의 손상을 피하기 위해. 2. 건조 방지 : 오랫동안 사용되지 않으면 크로마토 그래피 컬럼에 적절한 용매로 채워져 양쪽 끝에 플러그를 밀봉하여 건조 및 오염을 방지하십시오. 3. 서비스 수명 : C18 크로마토 그래피 컬럼의 서비스 수명은 약 100 ~ 200 배입니다. 출력 결과의 피크 모양이 흐려지면 출력 안정성이 감소합니다.
6. 자주 묻는 질문과 솔루션 1. 소금 문제 : C18 크로마토 그래피 컬럼을 사용할 때 소금이 발생할 수 있습니다. 이것은 일반적으로 컬럼의 이동상에서 염의 침전으로 인해 발생합니다. 이 문제를 해결하기 위해, 높은 염에 내성이있는 비례 밸브를 사용하거나 열 온도 조절기를 설치하는 비례 밸브를 사용하여 이동상의 구성을 최적화하는 것과 같은 측정 값을 가져갈 수 있습니다.
2. 열 막힘 : 열 막힘은 또 다른 일반적인 문제입니다. 이는 이동상에서 불순물의 침착, 샘플의 불용성 물질 또는 컬럼의 완충 된 염의 침착 때문일 수 있습니다. 이 문제를 해결하기 위해, 막힘을 방지하기 위해 보호 기둥 또는 전면 열 필터를 사용하는 높은 수성 단계 사용과 같은 측정 값을 취할 수 있습니다. 기둥이 이미 차단 된 경우 Backflush 또는 초음파 청소와 같은 방법을 사용하여 복구 할 수 있습니다. 그러나 코어와 특정 유형에 유의하십시오
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