BCA (Diquinolinecarboxyl acid) 방법

BCA 방법이 필요한 워크 플로 :

• 수율 및 순도를 결정하기위한 단백질 정제 과정.
• 겔 전기 영동 전에 단백질 부하가 동일해야합니다.
• 단백질 표지 또는 변형 전에 올바른 양의 단백질이 사용되는지 확인하십시오.
• 세포 배양 연구에서, 단백질 발현 수준이 결정되었다.

BCA를 테스트하는 가장 좋은 방법

표준 BCA 방법

단백질 농도 범위가 선형 측정 범위 내에 있고 샘플 수량이 보통 인 일상적인 응용에 가장 적합합니다.

1. 샘플 준비 : 먼저 샘플에 간섭 물질이 없도록 단백질 샘플을 수집하고 준비하십시오.
2. BCA 작업 시약의 제조 : 일반적으로 테스트 키트 제조업체가 제공하는 특정 비율로 BCA 용액을 구리 (II) 설페이트 용액과 혼합하는 것이 포함됩니다.
3. 혼합 및 인큐베이션 : 전형적으로 큐벳 또는 시험관에 BCA 작업 시약에 단백질 샘플을 첨가합니다. 혼합물은 일반적으로 37 ℃에서 30 분 동안 인큐베이션된다.
4. 측정 : 인큐베이션 후, 각 샘플의 흡광도는 분광 광도계를 사용하여 562 nm의 파장에서 측정되었다.
5. 분석 : 샘플의 단백질 농도를 결정하기 위해 표준 단백질, 일반적으로 소 혈청 알부민 (BSA)의 흡광도 값과 흡광도 값을 비교합니다.

BCA 방법

많은 샘플을 동시에 분석 해야하는 고 처리량 스크리닝에 이상적입니다. 시약은 매우 효율적이며 대규모 연구 또는 산업 환경에서 종종 사용됩니다.

1. 샘플 준비 : 표준 분석과 마찬가지로 단백질 샘플이 먼저 준비됩니다.
2. BCA 작업 시약 : 동일한 시약을 준비하지만 마이크로 플레이트의 웰에 따라 부피를 조정하십시오.
3. 분취 량 및 배양 : 다 채널 피펫을 사용하여 단백질 샘플과 BCA 작업 시약을 96- 웰 플레이트의 웰에 분취 시키십시오. 정상적으로 37 ℃에서 30 분 동안 배양한다.
4. 측정 : 마이크로 플레이트 리더를 사용하여 562 nm의 파장에서 흡광도를 측정하십시오.
5. 분석 : 표준 방법과 마찬가지로, 표준 곡선을 사용하여 단백질 농도를 결정 하였다.

세제를 함유하는 샘플에 대한 개선 된 BCA 방법

세제는 BCA 반응을 방해 할 수 있기 때문에 세제를 함유 한 샘플에 특별히 사용됩니다. 이것은 특정 세포 유형 또는 조직에서 단백질을 추출하거나 막에 내장 된 단백질을 연구 할 때 일반적입니다.

1. 샘플 준비 : 샘플에서 단백질을 추출하고 세제의 농도에주의를 기울입니다.
2. BCA 작업 시약 : 표준 테스트 방법에 따라 준비하십시오.
3. 세제 호환성 시약 추가 :이 시약은 일반적으로 세제의 간섭 효과를 제거하기 위해 첨가되는 특수 BCA 키트로 제공됩니다.
4. 혼합 및 인큐베이션 : 표준 분석과 마찬가지로 샘플 및 작업 시약을 혼합하고 인큐베이션합니다.
5. 측정 및 분석 : 분광 광도계를 사용하여 흡광도를 측정하고 표준 곡선으로 단백질 농도를 결정하십시오.

BCA 자동화 방법 :

• 액체 취급 워크 스테이션 :이 기계는 정확도와 일관성을 위해 액체를 지정된 컨테이너로 자동으로 피펫 팅하도록 설계되었습니다.
• 통합 시스템 : 일부 플랫폼은 샘플 추가에서 흡광도를 읽는 것에 이르기까지 전체 프로세스를 통합하여 워크 플로를 단순화합니다.
• 소프트웨어 : 자동화 소프트웨어를 사용하여 각 탐지가 동일한 방식으로 수행되도록 프로토콜을 설정하는 데 사용될 수 있습니다.

수동 피펫 팅에 비해 자동화 된 BCA 방법의 장점 :

• 일관성 : 자동화는 각 단계마다 같은 방식으로 수행되도록하여 변동성을 줄입니다.
• 효율성 : 자동화 시스템은 여러 샘플을 동시에 처리하여 처리 속도를 높일 수 있습니다.
• 정확도 : 자동 피펫 팅은 볼륨 오류 및 교차 오염의 위험을 줄입니다.
• 데이터 무결성 : 자동화 시스템에는 종종 결과의 올바른 기록 및 저장을 보장하는 통합 데이터 관리 솔루션이 장착되어 있습니다.