C18 필러를 청소하는 방법

C18 필러를 청소하는 방법? C18 필러는 일반적으로 사용되는 역상 크로마토 그래피 필러이며 액체 크로마토 그래피 분석에 널리 사용됩니다. 표면에는 장쇄 알킬기가 있기 때문에 샘플에서 불순물을 흡착하기 쉽기 때문에 C18 필러의 정기적 인 청소는 분리 성능을 보장하는 중요한 단계입니다.

c18 필러

1. 기존 세정 방법 1. 용매 헹굼 : 적절한 순수 용매 (예 : 메탄올, 아세토 니트릴 등)를 사용하여 크로마토 그래피 컬럼을 통해 적절한 유속 (보통 1 ~ 2 mL/분)으로 헹구십시오. 플러싱 시간은 크로마토 그래피 컬럼의 오염 정도와 일반적으로 15 ~ 30 분에 필요한 플러싱 효과에 따라 조정될 수 있습니다. 이 방법은 크로마토 그래피 컬럼의 표면에 명백한 오염이없고 컬럼 내부의 불순물을 효과적으로 제거 할 수있는 상황에 적합합니다. 2. 용매 구배 헹굼 : 용매의 비율을 점차적으로 변화시켜 크로마토 그래피 컬럼을 헹구기 위해 유기 용매와 물의 다른 비율을 이동성 단계로 사용합니다. 초기에, 유기 용매의 낮은 비율 (예 : 80% 유기 용매 농도)이 사용 된 후 유기 용매의 비율이 점차 100%로 증가된다. 플러싱 효과의 균일 성을 보장하기 위해 용매의 비율과 유량은 안정적으로 유지되어야합니다. 이 방법은 컬럼 오염이 심하고 열의 잔류 물을보다 철저하게 제거 할 수있는 경우에 적합합니다.

2. 특정 오염을위한 세척 방법 1. 완충 염 침수로 인한 오염 : 유기 위상에 불용성이없는 완충 염 (예 : 포스페이트 등)을 사용하면 컬럼이 차단되면 약 60 ° C의 온수로 오랫동안 온수로 온수로 컬럼을 세척 할 수 있습니다. 버퍼링 된 염이 크로마토 그래피 컬럼에서 침전 된 경우, 컬럼 온도를 높이고 많은 비율의 수성 상 또는 순수한 수성 상으로 오랫동안 헹구려고 시도 할 수도 있습니다. 가장 일반적인 관행은 완충액 및 극성 화합물 잔류 물을 제거하기 위해 5% 메탄올 (또는 아세토 니트릴) 수용액으로 10 개의 컬럼 부피를 헹구는 것입니다. 2. 기존의 유기 오염 : 5% 메탄올 (아세토 니트릴) 수용액으로 10 개의 컬럼 부피를 헹구고, 크로마토 그래피 컬럼에서 완충액 및 일부 극성 화합물을 헹구십시오. 그런 다음 순수한 메탄올 또는 순수한 아세토 니트릴로 10 내지 20 컬럼 부피를 헹구고 일부 소수성 불순물을 헹구십시오. 압력이 여전히 높으면 유량을 적절하게 줄이고 플러싱 시간을 확장 할 수 있습니다. 위의 방법이 효과가없는 경우 10 ~ 20 열 볼륨을 헹구기 위해 이소프로판올 (또는 테트라 하이드로 푸란)을 선택할 수 있습니다. 3. 단백질 펩티드 막힘 : 0.1% 트리 플루오로 아세트산 (TFA)을 청소 이동 상에 첨가하여 흡착 된 단백질의 용리 능력을 향상시킬 수 있습니다. 문제를 여전히 해결할 수 없다면, 100 μL의 트리 플루오로 에탄올을 크로마토 그래피에 대해 주사를 시도하십시오.

3. 크로마토 그래피 컬럼의 재생 및 역 연결 1. 재생 : 재생 : 일련의 용매 (예 : 10% 메탄올, 아세토 니트릴, 이소프로판올 등)를 사용하여 컬럼을 낮은 유속으로 헹구고 각 용매는 총 20 시간 동안 기간 (예 : 4 시간) 동안 헹구었다. 재생 과정에서 오염 물질 오염을 방지하기 위해 연결 방법과 탐지 탱크에주의를 기울여야합니다. 2. 역 연결 : 크로마토 그래피 컬럼의 역 연결 및 일정 기간 (예 : 6 시간)에서 아세토 니트릴과 같은 용매와 헹구십시오. 역 연결은 칼럼이 폐기되기 전에 마지막 투쟁이며, 리버스 연결 후 공식적인 연결에 사용할 수 없습니다.

4. 참고 1. 용매 선택 : 사용하기 전에 사용 된 용매가 크로마토 그래피로되어 있고 기포를 제거하여 기포를 제거하십시오. 2. 유량 제어 : 플러싱 공정 동안, 컬럼의 내성 압력과 용매의 점도에 따라 적절한 유속을 선택해야한다. 3. 열 온도 제어 : 세척 과정에서 청소 효과를 향상시키기 위해 컬럼 온도를 적절하게 증가시킬 수 있습니다. 4. 소금 오염을 피하십시오 : 소금은 저장 중에 크로마토 그래피 컬럼에 손상을 일으킬 수 있기 때문에 장기 저장 중에 소금이 포함 된 이동성 단계를 사용하지 마십시오. 5. 정기적 인 유지 보수 : 정기적으로 크로마토 그래피 컬럼을 청소하고 유지하여 서비스 수명을 연장하고 분리 효과를 유지합니다.

C18 필러의 청소는 장기 안정성과 효율적인 분리 성능을 보장하는 중요한 단계입니다. 적절한 세척제를 선택하고 세척 조건을 최적화하고 적절한 세척 방법을 채택함으로써 필러 표면의 오염 물질과 잔류 물을 효과적으로 제거하고 원래의 분리 능력 및 서비스 수명을 복원 할 수 있습니다.

관련 읽기 권장 사항

사용자 설명서 : OT-2 액체 프로세서

가열 발진기 모듈 gen1 의 빠른 시작 안내서

핵산 준비를 자동화 해야하는 이유

전체 자동 피펫 워크 스테이션 브랜드 Hochuang Opentrons

Flex 플라스미드 준비 워크 스테이션 유연한 블록

Opentrons의 맞춤형 프로토콜 개발 기능 완전 자동 피펫 워크 스테이션