면역 침전 (IP)

면역 침전이 필요한 워크 플로

• 단백질-단백질 상호 작용에 대한 연구 :鉴定和验证与相关蛋白质相互作用的蛋白质。
• 번역 후 수정 분석 :富集具有特定修饰（如磷酸化或泛素化）的蛋白质。
• 기능적 결정 :在受控环境中研究蛋白质或蛋白质复合物的活性。

면역 침전하는 가장 좋은 방법

면역 침전 (클래식 면역 침전, 클래식 IP)

특정 단백질은 그들의 특성, 번역 후 변형 또는 추가 분석을 연구하기 위해 복잡한 혼합물로부터 분리된다.

1. 용해 완충제를 사용하여 세포를 용해하여 단백질을 방출합니다.
2. 표적 단백질에 대해 비드 (아가 로스 또는 자기)에 맞게 맞춤화 된 특정 항체를 부착합니다.
3. 세포 용 해물을 항체-자 및 비드 복합체와 함께 배양하여 표적 단백질에 결합한다.
4. 세척 완충액을 사용하여 비 종합적으로 결합 된 단백질을 세척하십시오.
5. 이어서, 표적 단백질은 용리 완충액을 사용하여 비드로부터 용리된다.
6. 원심 분리기 또는 자기 스탠드를 사용하여 용 해물로부터 항체 비드에 결합 된 단백질을 분리하십시오.

공동 면역 침전 (CO-IP)

주요 단백질과 그들의 잠재적 인 상호 작용 파트너는 복잡한 생물학적 샘플로부터 분리되어 단백질 사이의 상호 작용을 연구 하였다.

1. 세포는 용해되어 단백질을 방출한다.
2. 천연 단백질에 맞게 맞춤화 된 특정 항체는 비드에 부착됩니다.
3. 세포 용 해물을 항체-베드 복합체와 함께 인큐베이션 하였다.
4. 이 단계에서, 천연 단백질과 상호 작용하는 단백질은 공동체를 이용할 것이다.
5. 비특이적으로 결합 된 단백질은 세척 될 것이다.
6. 천연 단백질과 그의 상호 작용 단백질이 용리됩니다.
7. 원심 분리기 또는 자기 스탠드를 사용하여 항체 비드에 결합 된 단백질을 분리하십시오.

탠덤 친화도 정화 (탭)

특히 낮은 풍부 또는 일시적 단백질-단백질 상호 작용에 대한 연구를 위해 단백질 복합체의 고순도 정제를 달성합니다.

1. 유전자 적으로 관심있는 단백질을 이중 표지 시스템을 포함하도록 설계하십시오.
2. 이 변형 된 단백질을 발현하는 세포는 용해된다.
3. 용 해물을 먼저 단백질을 분리하기 위해 첫 번째 태그에 결합 된 비드와 함께 인큐베이션 하였다.
4. 특정 프로테아제를 사용하여 첫 번째 태그를 절단하십시오.
5. 두 번째 정제 라운드는 두 번째 태그에 결합 된 비드를 사용하여 수행되었다.
6. 이 단계 후, 단백질 복합체는 용리되고 매우 높은 순도를 갖는다.
7. 원심 분리기를 사용하여 구슬에 결합 된 단백질을 분리하십시오.

면역 침전이 어려운 이유 :

• 특이성 질문 : 비드 또는 항체에 대한 단백질의 비특이적 결합은 잘못된 양성을 유발할 수있다.
• 민감도 문제 : 저급 단백질은 효과적으로 흡착되지 않아 잘못된 네거티브를 초래할 수 있습니다.
• 단백질 상호 작용 유지 : 일부 단백질-단백질 상호 작용은 일시적이거나 약하기 때문에 IP 공정 중에이 효과를 포착하고 유지하는 것은 어렵습니다.

면역 침전 과정을 자동화하는 방법 :

• 액체 처리 워크 스테이션 :이 워크 스테이션은 솔루션을 자동으로 추가하고 제거하여 피펫 팅의 일관성과 정확성을 보장합니다.
• 비드 분리 : 자동화 된 플랫폼은 비드 분리를 처리하여 작동 시간을 줄이고 일관성을 향상시킵니다.
• 통합 시스템 : 일부 플랫폼은 샘플 준비, IP 및 다운 스트림 분석 (예 : 질량 분석법)을 하나의 워크 플로에 통합합니다.

수동 피펫 팅에 대한 면역 침전 자동화의 장점 :

• 일관성과 반복성 : 자동화는 인적 오류와 변동성을 줄입니다.
• 처리량 : 자동화 된 시스템은 여러 샘플을 동시에 처리하여 효율성을 향상시킬 수 있습니다.
• 오염 위험을 줄이기 : 수동 작동을 최소화하고 샘플 오염 가능성을 줄입니다.
• 최적화 솔루션 : 자동화 시스템에는 일반적으로 최적의 결과를 보장하기 위해 최적화 된 운영 절차가 제공됩니다.