LC-MS (액체 크로마토 그래피-질량 분석법)

LC-MS 샘플 준비와 관련된 워크 플로

LC-MS 샘플 준비는 일반적으로 이러한 워크 플로우에 사용됩니다.

1. 프로테오믹스 :用于蛋白质鉴定、定量和翻译后修饰分析。
2. 대사체 :研究小分子和代谢途径。
3. 약물 분석 :用于药物发现、药代动力学和代谢研究。
4. 환경 및 식품 분석 :用于检测污染物或残留物。

LC-MS 샘플 준비를위한 가장 좋은 방법

고체 추출 (SPE)

고체 추출 (SPE)은 분석 실험실에서 샘플의 제조에 중요한 기술이며 특히 LC-MS에 의한 크로마토 그래피 분석에 적합합니다. 이 방법은 주로 고체 고정상을 사용하여 액체 샘플로부터 분석 물을 분리하고, 간섭 화합물을 제거하면서 효과적으로 정제하고 농축 분석 물을 집중시킨다. SPE는 샘플-염색체 호환성을 향상시키고, 질적 및 정량 분석을 개선하며, 분석 시스템의 서비스 수명을 확장합니다. SPE는 신속한 가공 및 적응 자동화로 알려져 있으며, 특히 소변, 혈액 및 음식과 같은 복잡한 매트릭스 샘플을 처리하고 액체 액체 추출에 비해 회복 속도가 높아집니다.

• 칼럼 컨디셔닝 :通过溶剂对色谱柱中的吸附剂进行条件化，准备其有效结合分析物。
• 샘플 로딩 :将样本引入经过条件化的吸附剂中。在这个阶段，分析物会被捕获，同时一些杂质也可能附着。
• 세탁:清除非特异性结合的杂质，以提高捕获分析物的纯度，并减少分析中的背景干扰。
• 용리 및 수집 :最后，从吸附剂中洗脱分析物。如有必要，对洗脱液进行进一步处理，以确保其与LC-MS/MS的兼容性，然后进行分析。

단백질 침전

단백질 침전은 생물학적 샘플에서 단백질을 제거하는 데 고안된 널리 사용되는 기술입니다. 이 방법은 단백질 함량이 높은 샘플 (예 : 혈장 또는 혈청)을 갖는 샘플의 제조에 중요합니다. 단백질을 침전시킴으로써, 샘플 매트릭스는 단순화되고 후속 LC-MS 분석과의 간섭이 감소 될 수있다. 이 방법은 단순성, 속도 및 효율성에 대해 매우 유리하며 크고 복잡한 생물학적 기질을 처리하는 데 사용될 수 있습니다. 소분자 분석을 향상시킬뿐만 아니라 LC-MS 분석의 정확도와 감도에 영향을 줄 수있는 매트릭스 효과를 최소화합니다.

• 침전 시약의 추가 :向生物样本中加入沉淀试剂（如乙腈、甲醇或三氟醋酸），使蛋白质变性并聚集。
• 품다:允许混合物孵育，以促进蛋白质的完全沉淀。此步骤的持续时间可能根据沉淀试剂和样本类型有所不同。
• 원심 분리 :对样本进行离心，分离沉淀的蛋白质与含有分析物的上清液。
• 상청액 컬렉션 :小心收集上清液，上清液现在包含了感兴趣的分析物，免受蛋白质干扰。
• 선택 사후 처리 :根据LC-MS分析的具体要求，上清液可能会进一步处理，例如溶剂蒸发或稀释。

액체-액체 추출 (LLE)

액체-액체 추출은 2 개의 비 호환 액체 (보통 수성 상 및 유기 용매)에서 분석 물의 용해도 차이에 기초하여 분석 물의 분리를 지칭한다. 이 접근법은 생물학적 유체와 같은 복잡한 수성 기질로부터 분석 물을 추출하는 데 필수적이며, 비극성 또는 중간 정도의 극성 화합물에 특히 효과적이다. LLE는 수용성 간섭을 제거하면서 효과적으로 분리하고 집중하는 능력에 대해 매우 존경 받고 LC-MS 분석의 민감도 및 특이성을 향상시킵니다. 이 기술은 널리 사용되며 다른 샘플 크기에 따라 조정할 수 있습니다.

• 위상 선택 및 혼합 :选择适当的不可混溶溶剂——一个水相和一个有机相。将样本与这些溶剂混合，确保分析物优先溶解在有机相中。
• 위상 분리 :让混合物静置，或使用离心加速相分离。分析物将分配到有机溶剂中，而大多数水相中的杂质则留在水层。
• 유기농 상 수집 :小心收集有机相，其中包含提取的分析物。此步骤需要精确操作，以避免相间交叉污染。

LC-MS 샘플 준비에서의 유도체 화

LC-MS 샘플 제조에서의 유도체화는 분석 물의 활성 그룹을 변환하여 탐지 및 정량적 기능을 향상시키는 화학적 변형 공정이다. 이 기술은 특히 발색단 또는 형광 단이없는 것과 같은 고유 한 검출 기능이 낮은 분석에 특히 적합합니다. 유도체 화학은 변동성, 안정성 및 이온화 효율과 같은 분석 물의 물리적 및 화학적 특성을 향상시켜 LC-MS 분석에 더 적합합니다. 스테로이드, 아미노산 및 설탕과 같은 특정 화합물 클래스를 분석하는 데 필수적이며 감도, 선택성 및 전반적인 분석 성능을 크게 향상시킬 수 있습니다.

LC-MS 샘플 준비가 그렇게 어려운 이유 :

• 매트릭스 효과 : 많은 샘플, 특히 생물학적 샘플에는 LC-MS 분석을 방해하는 복잡한 매트릭스가 있습니다.
• 분석 된 다양성 : 다른 분석 물에는 다른 준비 기술이 필요할 수 있습니다.
• 민감도와 특이성 : 필요한 민감도와 특이성을 달성하려면 신중한 최적화가 필요합니다.