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分子生物学の分野では、PCR(ポリメラーゼ連鎖反応)は強力な技術ツールであり、DNAの増幅と検出に広く使用されています。この技術プロセスのコアキャリアとして、PCR反応溶液の精度と科学的性質は、PCR実験の成功または失敗に直接関係しています。今日、PCR反応液の主要な成分を深く探索し、PCR反応でこれらの重要な要素がどのように連携してDNAの正確な増幅を促進するかを明らかにします。
1。PCR反応溶液の主な成分1。テンプレートDNA関数:増幅するターゲット配列を含むPCR増幅の出発材料。要件:一本鎖または二本鎖DNAである場合がありますが、特定の純度と完全性を保証する必要があります。臨床検査標本の場合、核酸をテンプレートとして抽出するために、迅速かつ簡単な方法がよく使用されます。 2。特定のプライマー作用:人工的に合成されたオリゴヌクレオチドフラグメントを使用して、テンプレートDNAの配列を特異的に認識および結合して、DNAポリメラーゼを導き、鎖を伸ばします。設計の原則:長さは一般に15〜30のベースであり、一般的に約20bpで使用されます。 G+C含有量は40〜60%です。これは、プリンまたはピリミジンの連続配置を避けるためです。プライマーダイマーの形成を防ぐために、内部二次構造とプライマー、特に3 '端の間の補完を避けてください。増幅効率を向上させるために、3 '末端のベースを厳密にペアにする必要があります。 3.熱耐性DNAポリメラーゼ(TAQ DNAポリメラーゼなど)の役割:PCR反応におけるDNA鎖の拡張を触媒します。特徴:熱安定性が高く、PCRの高温変性条件下で活動を維持できます。投与量:一般的な反応システムに追加された酵素の量は2-4Uです。 4。4種類のDNTP(デオキシヌクレオシド三リン酸)機能:DNA合成の原料として、DNAポリメラーゼの触媒下で新しく合成されたDNA鎖に組み込まれます。濃度:一般的に使用される濃度は50〜200μmであり、4種類のDNTPの濃度は、PCR反応のバランスと効率を確保するために等しくなければなりません。 5。PCR反応バッファー機能:PCR反応に必要なpH値とイオン環境、および必要な補因子(Mg^2+など)を提供します。特徴:mg^2+の濃度は、PCR反応の特異性と収率に大きな影響を与え、実験条件に応じて最適化する必要があります。
2。PCR反応流体を処理するためのOT-2自動ピペッティングロボット1.コア機能:OT-2は、ハードウェアモジュール性、柔軟性、カスタマイズの特性を備えたデスクトップレベルの自動ピペッティングプラットフォームであり、多くの一般的なアプリケーションの自動化を実現できます。 PCR反応液をデバッグすると、OT-2は、テンプレートDNA、プライマー、DNTP、バッファー溶液、Mg^2+など、さまざまな反応成分を正確に分布および混合し、PCR反応液の精度と一貫性を確保します。 2。パイプラインの精度:OT-2が液体の1ULを吸収する場合、精度のCV値は±5%であり、これは市場で10倍高価なピペッティング機器の値に匹敵します。したがって、PCR反応液をデバッグするとき、OT-2は各コンポーネントの正確な分布を確保し、人工エラーを減らすことができます。 3.モジュラー設計:OT-2ボードのモジュラー設計により、ユーザーは、温度制御モジュール、磁気ビーズ精製モジュールなど、ニーズに応じてさまざまな機能モジュールを自由に組み合わせることができます。 PCR反応液をデバッグすると、ユーザーは必要に応じて温度制御モジュールを取り付けて反応温度を制御し、正しい温度条件下でPCR反応が実行されるようにします。 4。温度制御モジュール:温度制御モジュールは、OT-2のOpentronsが特別に設計した機能モジュールの1つであり、反応システムの温度を正確に制御するために使用されます。 PCR反応では、PCRの反応には、特定の温度条件下で3つの段階の変性、アニーリング、および伸長が必要であるため、温度制御が重要です。温度制御モジュールにより、これらのステップが正しい温度範囲内で実行されることを保証し、PCR反応の成功率と製品の品質を保証します。
PCR反応液をデバッグするとき、Opentronsは主に自動ピペッティングロボットOT-2と、温度制御モジュールやその他の機能モジュールをサポートします。これらのデバイスは協力して、PCR反応液の正確な調製とPCR反応の成功を保証します。
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