タンパク質サンプル調製の原則は何ですか？

タンパク質サンプルの調製は、タンパク質研究を実施する際の実験の重要なステップです。実験結果の精度と信頼性に直接影響するため、タンパク質サンプル調製の原則を理解することが特に重要です。タンパク質サンプルの調製には、正確な操作が必要であるだけでなく、抽出、精製、貯蔵など中にサンプルが汚染され、劣化されないように、研究目標に基づいて適切な治療方法を選択する必要があります。

タンパク質サンプル準備

1.一貫性と劣化の防止1。一貫性を維持する：実験全体で、人工エラーの導入を避けるために、サンプル処理の一貫性を可能な限り維持する必要があります。制御グループや実験グループを含む同じ方法と条件を使用して、異なるサンプルを処理しました。 2。分解の防止：タンパク質サンプルはすぐに処理するか、収集後に冷蔵して保存する必要があります。凍結サンプル、液体窒素または-80°Cフリーザーを使用して、タンパク質分解を防ぐ必要があります。サンプルを準備するときは、タンパク質分解の速度を遅くするために、サンプルを低温に保ちます。冷却装置は、アイスボックスで操作するか、使用できます。長期にわたる遠心分離、高温への曝露、pHの変化、またはタンパク質分解を減らすための酵素活性の存在を避けてください。

2。溶解度と不純物の除去1。溶解度の向上：適切なバッファーを選択してタンパク質を溶解すると、pH値はタンパク質の最適な溶解度条件を満たす必要があります。通常、TRIS-HCL、PBS、HEPESなどのバッファーは、分析するすべてのタンパク質サンプルが溶解状態にあり、安定して再現可能であることを確認するために使用されます。 2。不純物を除去する：核酸、組織の断片、または特定の高度の無関係なタンパク質を含むがこれらに限定されない下流の用途に干渉する不純物を除去してみてください。これらの不純物は、タンパク質濃度の測定、電気泳動移動度、および他の分子との相互作用に影響を与える可能性があります。

3.下流の実験に従って抽出方法を選択1。抽出方法を選択します。下流の実験の特定の要件に従って、適切なタンパク質抽出方法を選択します。たとえば、タンパク質のリン酸化状態が必要な場合、タンパク質のリン酸化を維持できる抽出方法を使用する必要があります。 2。抽出されたタンパク質の種類：実験要件に従って、変性タンパク質または活性タンパク質を抽出するかどうか、および総タンパク質または細胞内構造成分タンパク質を抽出するかどうかが決定されます。細胞内構造分離は、低倍率タンパク質の負荷量を増加させ、検出の難易度を軽減し、特定の細胞成分のタンパク質を分析することもできます。

4。サンプル処理と記録1。サンプル処理：準備プロセス中に、サンプルの汚染を避けるために、きれいなワークベンチ、実験用具、手袋を使用することに注意する必要があります。すべてのツール、試薬のボトル開口部、チューブはきれいに保つ必要があります。 2。詳細な記録：サンプル準備プロセス全体で、サンプルソース、処理手順、濃度などを含む詳細情報を記録する必要があります。これにより、後続の実験で追跡および分析できます。

5。タンパク質の定量化と変性1。タンパク質の定量化：タンパク質サンプルの濃度を決定して、その後の実験で正しいサンプル量を使用することが非常に重要です。タンパク質濃度は、ブラッドフォード、BCA、ローリーなどの方法を使用して決定できます。 2。タンパク質の変性：実験的ニーズに応じて、タンパク質の変性が必要になる場合があります。一般的に使用される変性剤にはSDなどが含まれ、タンパク質は加熱によって変性化できます。

タンパク質サンプルの調製には、サンプルの品質と一貫性を確保するために一連の原則が必要であり、それにより信頼できる実験結果が得られます。これらの原則は、サンプル収集から治療、溶解、不純物除去、抽出方法の選択、サンプル処理と記録、タンパク質の定量化と変性まで、あらゆる側面をカバーしています。

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