タンパク質サンプルを準備するための基本的な手順

タンパク質サンプルの調製は、生物学、化学、医学研究の重要なリンクであり、その後の分析と実験の基礎を提供します。プロテオミクス研究、酵素活性分析、抗体スクリーニングのいずれであっても、タンパク質サンプルの調製は重要な役割を果たします。

タンパク質サンプル準備

1。サンプルの選択と治療1。サンプル選択：実験目的に従って、サンプルとして適切な組織または細胞を選択します。組織サンプルの場合、新鮮な治療を確保し、結合組織と脂肪組織を除去する必要があります。細胞サンプルの場合、異なる遠心分離および収集方法を懸濁しているか、接着細胞を添加するかによって使用できます。 2。サンプルの断片化：細胞内のタンパク質を放出するには、サンプルを壊す必要があります。一般的に使用される方法には、研削、均質化、超音波、酵素溶解などが含まれます。タンパク質の分解を減らすために、粉砕プロセス中に温度を低く保つことに注意してください。

2。タンパク質抽出1。ライセートを選択：サンプルタイプとその後の実験的ニーズに従って適切な溶解物を選択します。一般的に使用される溶解物には、RIPA、NP-40、SDSなどが含まれます。細胞膜または細胞壁を破壊し、タンパク質を放出することができます。 2。溶解操作：氷の上のサンプルに溶解物を追加し、十分な均質化または研削を行い、タンパク質の完全な放出を確保します。溶解後、不溶性物質は遠心分離により除去され、タンパク質上清を得ます。

3。タンパク質濃度の決定1。決定方法：BCA法、ブラッドフォード法、またはローリー法を使用して、タンパク質濃度を決定します。これらの方法は、タンパク質が特定の試薬と反応して色の変化を生成するという原則に基づいています。 2。濃度調整：測定結果に従ってタンパク質濃度を調整して、実験条件を均一にします。これには通常、タンパク質サンプルを適切な濃度範囲に希釈または濃縮することが含まれます。

4。タンパク質変性（必要に応じて）1。変性目的：いくつかの実験では、タンパク質を変性させてコンフォメーションを変化させて、隔離して検出しやすくする必要があります。一般的に使用される変性剤には、SD、尿素などが含まれます。 2。変性操作：変性剤をタンパク質サンプルに加え、タンパク質（95°Cで5分間加熱など）を加熱してタンパク質を変性させます。変性タンパク質サンプルは、その後の電気泳動または免疫ブロット実験に直接使用できます。

5。サンプルストレージと記録1。サンプルストレージ：調製したタンパク質サンプルをアリコートして、分解と汚染を防ぐために適切な条件（-80°C冷蔵庫など）で保管します。 2。記録情報：後続の実験を分析および追跡するために、サンプルの処理手順、濃度測定結果、およびその他の情報を詳細に記録します。タンパク質サンプル調製プロセス全体で、汚染を避けるために滅菌作業仕様に厳密に従うべきであることに注意する必要があります。同時に、最良の実験結果を得るには、実験的ニーズに従って適切な溶解物と抗体を選択する必要があります。さらに、準備プロセスは、特定の実験的ニーズに応じて調整および最適化できます。

タンパク質サンプル調製の基本的なプロセスには、サンプルの選択と処理、タンパク質抽出、タンパク質濃度測定、タンパク質の変性（必要に応じて）、およびサンプル貯蔵と記録が含まれます。一緒に、これらのステップはタンパク質サンプルの品質と信頼性を確保し、その後の実験分析のための強固な基盤を提供します。

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