NGS自动化建库的流程

NGS自动化建库是指利用自动化技术和设备，对DNA或RNA样本进行高通量、高效率、高精度的文库构建过程。这一过程涵盖了从样本处理、DNA/RNA提取、文库构建到质控等多个环节，旨在减少人工操作，提高实验效率和准确性。

一、样本准备与DNA/RNA提取

1、样本收集：收集目标样本，如细胞、组织、血液等，确保样本的完整性和代表性。

2、样本处理：根据样本类型选择合适的处理方法，如细胞裂解、组织研磨等，以释放DNA或RNA。

3、DNA/RNA提取：采用合适的提取方法（如酚氯仿法、磁珠法、柱子法等）从样本中纯化出高质量的DNA或RNA。

二、文库构建

文库构建是NGS自动化建库的核心步骤，通常包括以下子步骤：

1、DNA/RNA片段化：

1>将DNA或RNA分子切割成较小的片段，以便进行后续的测序反应。片段化可以通过物理方法（如超声波破碎）或化学方法实现。

2>片段大小通常在100-1000碱基对之间，具体取决于测序平台和实验需求。

2、末端修复和加A尾：

1>对片段化的DNA或RNA进行末端修复，以去除末端损伤并添加磷酸基团和3’末端A尾。这些修复步骤有助于后续的连接适配体和文库扩增。

3、连接适配体：

1>将经过修复的DNA或RNA片段连接到特定的适配体（也称为接头）上。适配体是含有特定序列的DNA或RNA片段，用于后续的PCR扩增和测序反应。

2>在自动化建库过程中，这一步骤通常通过自动化的移液和连接反应实现。

4、文库扩增：

1>通过PCR扩增将连接了适配体的DNA或RNA片段扩增至足够数量，以形成可用于测序的文库。

2>扩增过程中使用具有适配体序列的引物进行特异性扩增。

三、文库质控

文库质控是确保文库质量和测序结果可靠性的重要步骤。常用的文库质控方法包括：

1、定量PCR：用于检测文库的浓度和扩增效率。

2、聚丙烯酰胺凝胶电泳：用于评估文库片段的大小分布。

3、质谱分析：用于进一步验证文库的质量和纯度。

四、功能：

1、自动化操作：通过自动化设备实现样本处理、文库构建等步骤的自动化，减少人工干预。

2、提高效率：自动化流程缩短了实验周期，提高了实验效率。

3、降低误差：减少人为操作带来的误差，提高实验结果的准确性和稳定性。