BCA（ジキノリンカルボン酸）法

BCAメソッドを必要とするワークフロー：

• 収量と純度を決定するためのタンパク質精製プロセス。
• ゲル電気泳動の前に、タンパク質の負荷が等しいことを確認してください。
• タンパク質の標識または修飾の前に、正しい量のタンパク質が使用されていることを確認してください。
• 細胞培養研究では、タンパク質発現レベルが決定されました。

BCAをテストする最良の方法

標準BCAメソッド

タンパク質濃度範囲が測定の線形範囲内で、サンプル量が中程度である日常的な用途に最も適しています。

1. サンプルの準備：最初にタンパク質サンプルを収集して準備して、サンプルに干渉物質がないことを確認します。
2. BCA作業試薬の調製：これには通常、BCA溶液と銅（II）溶液を特定の割合で混合することが含まれます。これは通常、テストキットメーカーによって提供されます。
3. 混合とインキュベート：通常、キュベットまたは試験管内のBCA作業試薬にタンパク質サンプルを追加します。混合物を通常、37°C​​で30分間インキュベートします。
4. 測定：インキュベーション後、分光光度計を使用して各サンプルの吸光度を562 nmの波長で測定しました。
5. 分析：標準タンパク質、通常はウシ血清アルブミン（BSA）の標準タンパク質の吸光度値と吸光度値を比較して、サンプルのタンパク質濃度を決定します。

マイクロプレートBCAメソッド

多くのサンプルの分析を同時に必要とするハイスループットスクリーニングに最適です。その試薬は非常に効率的であり、大規模な研究や産業環境でよく使用されます。

1. サンプルの準備：標準アッセイと同様に、タンパク質サンプルが最初に調製されます。
2. BCA作業試薬：同じ試薬を準備しますが、マイクロプレートのウェルに従ってボリュームを調整します。
3. アリコートとインキュベート：マルチチャネルピペットを使用して、タンパク質サンプルとBCA作業試薬を96ウェルプレートのウェルにアリコートします。通常、37°C​​で30分間インキュベートします。
4. 測定：マイクロプレートリーダーを使用して、562 nmの波長で吸光度を測定します。
5. 分析：標準的な方法と同様に、タンパク質濃度は標準曲線を使用して決定されました。

洗剤を含むサンプルのBCAメソッドの改善

洗剤はBCA反応を妨げる可能性があるため、洗剤を含むサンプルに特別に使用されます。これは、特定の細胞型または組織からタンパク質を抽出する場合、または膜に埋め込まれたタンパク質を研究する場合によく見られます。

1. サンプルの準備：サンプルからタンパク質を抽出し、界面活性剤の濃度に注意してください。
2. BCA作業試薬：標準的なテスト方法に従って準備します。
3. 洗剤の互換性試薬の追加：これらの試薬は通常、洗剤の干渉効果を排除するために追加される特殊なBCAキットで提供されます。
4. 混合とインキュベート：標準アッセイと同様に、サンプルと作業試薬を混合してインキュベートします。
5. 測定と分析：分光光度計を使用して吸光度を測定し、標準曲線によるタンパク質濃度を決定します。

BCAメソッドを自動化する方法：

• 液体ハンドリングワークステーション：これらのマシンは、精度と一貫性のために指定された容器に液体を自動的にピペットするように設計されています。
• 統合システム：一部のプラットフォームは、サンプルの追加から吸収性の読み取りまでのプロセス全体を統合し、ワークフローを簡素化します。
• ソフトウェア：自動化ソフトウェアを使用して、プロトコルをセットアップして、各検出が同じ方法で実行されるようにすることができます。

手動ピペッティングと比較した自動BCAメソッドの利点：

• 一貫性：自動化により、各ステップが毎回同じ方法で実行されることを保証し、変動性を低下させます。
• 効率：自動化システムは、複数のサンプルを同時に処理し、処理を高速化できます。
• 精度：自動ピペッティングは、体積エラーと相互汚染のリスクを減らします。
• データの整合性：自動化システムには、結果の正しい記録とストレージを確保する統合データ管理ソリューションが装備されていることがよくあります。