フローサイトメトリーサンプル調製

フローサイトメトリーとは何ですか？

フローサイトメトリーは、細胞表面および細胞内の分子の発現を評価するために使用される複雑なレーザーベースの技術です。研究と診断の中心にあり、個々の細胞をパラメーター分析に同時に分析し、混合集団のさまざまな細胞タイプを特徴付けるのに役立ち、細胞のサイズと体積で測定できます。フローサイトメトリーアッセイは、分離細胞亜集団の純度を決定し、さまざまな細胞集団、さらには蛍光活性化細胞ソート（FACS）と呼ばれるプロセスを分類します。これは、細胞タンパク質またはDNAに関連するヨウ化プロピジウムなどのリガンドに対する蛍光抗体で標識された細胞によって放出される蛍光の強度を検出することによって達成されます。

フローサイトメトリーとは何ですか？

その構成と目的のアプリケーションに応じて、フローサイトメトリーには、次のようなさまざまなコンポーネントと機能を持つことができます。

• 流体システム：该系统以单列方式运输细胞，确保每次只有一个细胞通过激光束进行分析。
• レーザ：用于在细胞穿过光束时照亮细胞。根据细胞仪的配置，可能会有多个不同波长的激光器，以便同时检测多个荧光标签。
• 光学システム：该系统检测散射光和荧光。它包括镜头和滤光片，以确保检测到适当的光。
• 検出器：将光信号转换为电子信号，常见的检测器包括用干前向散射(FSC)的光电二极管和用干侧向散射(SSC) 和荧光的光电倍增管(PMT）。
• 電子システム：解释从探测器接收到的信号并将其转换为可以可视化和分析的数据点。

フローサイトメトリーサンプルを準備する方法

フローサイトメトリーのサンプル調製には、単一の細胞懸濁液（通常は細胞培養または組織サンプルから）を作成し、これらの細胞を非標識またはフルオロフォア標識抗体とインキュベートします。一般的なFCサンプル準備方法は次のとおりです。

• 密度勾配遠心分離：该方法用于从血液等异质样本中分离特定细胞群，例如淋巴细胞。
• 直接免疫蛍光染色：用荧光染料结合的抗体直接对细胞进行染色。
• 間接免疫蛍光染色：首先用未结合的一抗对细胞进行染色，然后用识别一抗的荧光素结合的二抗对细胞进行染色。

フローサイトメトリーサンプルの準備が非常に難しいのはなぜですか：

• 細胞の活力：調製中に細胞の健康と活力を維持することが重要ですが、挑戦的です。
• 染色特異性：非特異的染色または（バックグラウンド）蛍光なしで蛍光ラベルまたは抗体の特異的結合を確保します。
• サンプル不均一性：複数の細胞タイプまたは状態と混合したサンプルの治療は、調製プロセスを複雑にする可能性があります。

手動のピペッティングと比較して、フローサイトメトリーサンプル準備の自動化の利点は次のとおりです。

• 一貫性：自動化により、均一なサンプル処理が保証され、変動性が低下し、再現性が向上します。
• 効率：自動化されたシステムは、複数のサンプルを同時に処理し、準備プロセスを簡素化できます。
• サンプルの損失を減らす：自動化機器はサンプルをより正確に処理し、それにより損失を最小限に抑えることができます。
• 信頼性：標準化された方法を自動化して、人的エラーを減らし、サンプルの準備を確保します。