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磁珠分选是一种基于磁性微粒(磁珠)与目标物质的特异性结合,通过外加磁场对目标物质进行快速分离和纯化的实验技术。这项技术广泛应用于生物学、化学分析、医疗诊断等领域,尤其是在核酸、蛋白质、细胞等分离纯化中具有显著优势。
一、基本原理
磁珠分选利用磁性珠子(磁珠)与目标物质(如细胞表面的特定抗原)之间的特异性结合,在外部磁场的作用下实现目标物质的分离和纯化。磁珠通常由铁氧化物(如Fe3O4)或其他磁性材料制成,表面修饰有特定的分离物质(如抗体、亲和配体等),以增加其与目标物质的亲和力。
二、操作步骤
磁珠分选的步骤一般包括样品处理、磁珠结合、分离和洗脱等:
1、样品处理:对细胞样品进行预处理,如细胞裂解、蛋白质提取等,以释放目标物质或使细胞处于适合分选的状态。
2、磁珠结合:将修饰有特定抗体的磁性珠子加入样品中,经过充分混合后,磁珠与目标物质(如细胞表面的特定抗原)发生特异性结合。
3、分离:通过外加磁场的作用,将磁性珠子及其结合的目标物质集中到一定位置,从而实现目标物质与非目标物质的分离。
4、洗脱:在需要时,通过改变条件(如pH、离子浓度等)来破坏磁珠与目标物质之间的结合,从而将纯净的目标物质洗脱下来。
三、分选方法
磁珠分选可以采用基于管或基于柱的方法进行:
1、基于管的磁性分离方法:将磁性标记细胞的悬浮体放置在磁铁中,允许标记细胞移动至磁铁附近并被吸附,随后进行分离。
2、基于柱的磁性分离方法:将磁性标记细胞的悬浮体通过磁铁内的分离柱进行分离。分离柱中的磁场会捕获标记细胞,而未被标记的细胞则随液体流出。
四、分选类型
根据被保留或隔离的内容,磁珠分选可以分为阳性分选和阴性分选两种方式:
1、阳性分选:选择需要收集的细胞作为目标群体,利用抗体直接标记目标细胞,并通过外加磁场作用使这些细胞被吸附到分离柱或试管壁上,从而实现分离。这种方法速度快、操作简单、纯度高、回收率高,适用于目标细胞具有特异性强的表面标志的情况。
2、阴性分选:通过标记非目标细胞并将其去除,从而间接获得目标细胞。这种方法可以避免直接标记目标细胞可能引起的细胞活化问题,适用于需要去除特定细胞亚群或目标细胞表面没有特异性抗体的情况。
五、应用领域
磁珠分选技术广泛应用于医学、生物学、药物研发等领域,如分离和纯化DNA、RNA、蛋白质等生物分子,进行酶联免疫吸附试验(ELISA)等免疫分析,以及分离特定的细胞类型等。在细胞生物学和临床研究中,磁珠分选已成为高质量细胞分选的标准方法。
磁珠分选是一种高效、特异且广泛应用的细胞分离技术,其原理和操作步骤相对简单明了,可根据具体需求选择不同的分选方法和类型。
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